求教 哪位高手做过软琼脂克隆形成实验

cookiezhang

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. g7 s: [8 P/ e( ~想知道用的是哪家公司的琼脂糖啊？

mike19840320

有个疑问，琼脂糖应该是做电泳用的，而软琼脂是做固体培养基用的，但为什么我用软琼脂就做不成功呢？？

zzc2211

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; r7 @8 q# k& `! r明天我看看

embryonic12

回复 zzc2211 的帖子2 I: y% j0 W) k1 m  K; k5 [; T

" M2 n+ l- U6 ?; B( U' N% e: u4 u" f非常感谢1; R! a: d9 j$ o$ @6 u
但是第七步不明白，为什莫要补水呢？平时养细胞为什麽不用补水呢？0 r6 f* e8 }6 T' r/ k- m5 a
甚盼指导

zzc2211

回复 cookiezhang 的帖子' l/ g5 K9 R/ N! c4 I

2 {3 s7 O8 x) B" K' `! h' \今天刚忙完，有点晚。
6 p+ l0 ~7 H$ E& m我用的这个：
& @6 Q, D8 z1 ?2 O$ zBiowest
% v& R4 Z) n7 ?/ b4 }: cRegular agarose g-10; e" P* U& f# l/ g  s# i
Lot no.:111860
. R2 ?( m# H" a. r5 l/ B9 u

zzc2211

回复 embryonic12 的帖子$ y: Z7 \: I( i# f" W2 _) ]
4 N$ c4 E: ~0 C) b- f7 f
补水的原因：soft agar克隆形成需要较长时间，从铺上细胞到克隆形成一般2周左右，我做的一个细胞10天，这是比较快的。也听说4周以上才长好的。不论你的培养箱密闭多么好，（当培养箱开关次数很多时失水尤其多）总会有一些水分蒸发，如蒸发过多，胶干细胞死亡，当你铺好凝固后，胶表面光滑平整，失水后胶表面会不同程度的高低不平，颗粒感，此时需要补水。如一次补水过多，个人认为有可能造成培养环境营养物质或离子的稀释，所以我每隔几天就少量补水。

cookiezhang

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! j* t. C( p5 t. @
: u# y& p& x0 }' P: q" S& `0 x) u谢谢！！

qyguoguo

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; A4 n; D8 N3 {8 t( p6 m& ~
对不起，这个我还真不清楚，师兄留下来的，我改天帮你问问啊，

hndxws

我看到也有不铺胶的，时间可能还会短点。在什么情况下要用铺胶？什么时候可以用不铺胶的代替？请教

embryonic12

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; Y) z' s' D3 `8 C; {8 e: v你现在有没有弄清用什么公司的琼脂／琼脂糖及货号啊？