求教 哪位高手做过软琼脂克隆形成实验

daviddow

都可以，不过soft agar更好些吧。感觉琼脂糖太滑了，照相好像很漂亮

biovictor

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请问，不处理那会不会污染呢？

linchee

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) t1 C* k8 e8 d* l) f
你的这个浓度好像很难达到半凝固状态吧，浓度觉得稍微摸索下也好。

conanthird

本人实在愚钝，没看明白这个具体怎么操作。是底层为胶，上层为细胞和胶的混合物吗?# {7 v7 ]& W% D
还是底层为胶，中间为细胞，上层为胶？

huanmiao2005

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9 N  R1 Y5 j; @" b8 v3 n/ u2 o) J) ^; ~$ z4 O% p+ v9 N2 a
我想请问 铺上层胶时 42度温度是否有点高 细胞在这种温度下不会受影响吗

zzc2211

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4 C8 \9 ^) |5 l1 }6 n42℃，混入一般2×培养液，加上离心管吸热，还有操作时间，经历这些降温，我个人做的还行

linzi214

铺底层胶的时候是没有细胞的，温度可以再42°C，但是铺上层胶是琼脂糖和细胞悬液的混合物，胶的温度最好在37°C左右，温度太高，细胞都死掉了，但是低的话，会出现还没等把悬液混合好，胶就凝固了。

komyati

回复 zzc2211 的帖子" \0 O/ i3 j4 T9 @/ N

* b% G) ~4 K. i) U* j" l; j谢谢，学习了

hanbiao1982

我是这样做的：A。配制2×DMEM+2倍所需的FBS和2倍双抗；B.做的前一天配制1.2%的下层胶，0.6-0.8的上层胶，高压，用时上或下层胶：培养基=1：1 。C: 1、35mm的培养皿下层胶及培养基混合液为1.5ml.室温放置30min。2、消化细胞，计数，5000个/皿。3、注意胶和培养基在使用前均需要置于40度水浴防止凝固。D:将细胞用预热的培养基重悬再与上层胶混匀，种于下层胶上，迅速摇晃铺匀。E：一周补充两次培养基，每次约700-750ul.

haifengteng

我想向大家请教关于悬浮细胞的此类实验，比如myeloma，不知有没有做过，能不能给些建议