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ES 细 胞 是 来 自 着 床 前 胚 胎 或 胎 儿 原 始 生 殖 细 胞 的 、可* O8 @1 X( I. J t; W
在体外分化状态下长期增殖传代培养的、具有稳定的二倍体
: y E8 p" M+ V5 g1 D; c4 y核型和多能干细胞表面特异标记的、可分化为三个胚层来源' _2 ?0 g( t; [
的各种组织及细胞类型的永久细胞系。ES 细胞鉴定的理论
. j }" f! ?$ D: K+ b基础是其生物学特性。
, \5 R9 X* t7 ]/ y& C 形态学特征 ES 细胞在胰酶和无 Ca2+、Mg2+培养液中形
# q, K* _, B' m [0 x/ D成相对扁平紧密的克 隆 群 , 并 易 解 离 为 单 一 细 胞 ; 而 胚 胎 生3 ^$ b/ ? ~3 W* u2 a
殖细胞(EG 细胞)为圆形克隆群,且很难用常规方法解离。ES
* w# v7 q; Q$ y& e' v5 B9 _7 {细 胞 生 长 缓 慢 , 对 数 生 长 期 为 36 h, 而 EG 细 胞 对 数 生 长 期
7 c) B8 r, n L3 Q7 c& h: I8 G为 12 h。人 ES 细胞与哺乳动物 ES 细胞具有相似的形态特征:, s& }3 ]% N0 P6 Q+ m& T7 `' T
细 胞 体 积 小 , 核 大,胞 浆 少 , 有 一 个 或 多 个 核 仁 , 核 质 比 高。
) ~* @8 K2 O7 ~( aES 细 胞 在 体 外 培 养 时 呈 集 落 状 生 长 , 就 集 落 形 态 而 言 , 人
- q$ c4 p9 T) EEG 细胞集落与小鼠 ES 细胞集落更接近呈紧密牢固结合、多* {# V- ^$ e4 Z2 |7 K. |6 t
层密集立体生长的无明显细胞界限的集落; 而人 ES 细胞集0 {5 R: Y" Q u3 {
落呈相对松散、扁平状集落, 集落内细胞界限隐约可见。
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5 |1 S$ A, }; b核型分析 ES 细胞具有正常稳定的二倍体核型, 可作
# i; P5 r; S0 s3 @4 @9 U1 m为生物发育机制和移植分化细胞的 研究模型。4 X0 d1 ?1 z& ^, D& B
7 m' S* O* Q- N. a! g
端 粒 酶 活 性 端 粒 是 位 于 染 色 体 末 端 的 重 复 DNA 序
! r) n! S2 ~# F4 ^1 B列—TTAGGG, 其长度作为细胞分裂及细胞衰老的生物时钟。4 ~# i5 i* a; B3 R& K
它在每一次分裂中都会变短, 但可被端粒酶修复。端粒酶是
% l; @! ]5 Z* f6 E1 v一种核糖核蛋白, 与维持真核细胞染色体末端的端粒长度和6 z* ]$ F5 K/ q$ |* n8 N- z; a
控制细胞寿命有关。端粒长度对其复制寿命具有很重要的作# p. f/ U' i4 A; u4 u
用 , 端粒酶的 表 达 与 人 细 胞 系 的 永 生 化 程 度 高 度 相 关; 向 人
7 V2 B, D) I; B8 {, F: t的某些二 倍 体 细 胞 中 重 新 导 入 端 粒 酶 活 性 将 会 延 长 其 复 制
: v# n2 ~6 f5 D3 G# \7 I寿命; 人的二倍体细胞不表达端粒酶活性, 随着年龄的增长,
4 ~8 w3 O+ v0 K/ }. \ H0 D其染色体端粒 变 短 , 在 组 织 培 养 过 程 中 , 经 过 有 限 的 增 殖 期- w. w1 S5 Y9 e, Q* R
后, 即进入复制衰老状态。大多数体细胞的端粒酶活性都不高,$ {3 N/ U9 R; x! X& F. J F1 K; o6 C
并在 50~80 代有限的增殖后进入老化阶段。ES 细胞则表达1 X7 q3 T. I! U7 Z; k- ^$ e
高度端粒酶活性, ES 细胞即使长期培养 1 年, 传代 300 代仍* v7 @8 a8 C9 L
表现有高端粒酶活性, 表明其复制寿命要长于体细胞的复制
1 \' b/ T4 | D4 p( B( U寿命。由于 ES 细胞在体外培养中长期保持早期胚胎细胞的
/ t) J: x6 d! p ~8 |* _性质, 因而对研究细胞衰老和干细胞扩增机制有重要意义。/ M7 @7 T, f3 Z$ R% {* P
& p( E, p5 q T* L5 n/ U# [% P 细 胞 表 面 抗 原 的 表 达 ES 细 胞 具 有 表 达 早 期 胚 胎 细
% [# H# Q& C# v% P8 Z( |8 v# x4 `胞、EG 细胞表面抗原的特性。人 ES 细胞表面抗原的表达与6 G$ L0 p6 E% M X0 H
小鼠 ES 细胞存在明显的种属差异, 如小鼠 ES 细胞表达早期! t1 Z1 _, X) W/ y/ n' Y
胚胎细胞 的 特 异 性 表 面 抗 原 SSEA- 1, 但 并 不 表 达 SSEA- 3
k' }- l( `2 w% R和 SSEA- 4,而 人 ES 细 胞 则 表 达 人 早 期 胚 胎 阶 段 特 异 性 抗3 V' |# \1 d w# i% @
原 SSEA - 3,SSEA - 4,TRA - 1 - 60,TRA - 1 - 81; EG 细 胞 表 达; D! n+ f# F6 i1 N
SSEA- 1,SSEA- 3,SSEA- 4,TRA- 1- 60,TRA- 1- 81。 人 ES 细 胞! r: W( |3 s1 q8 p: h; c3 X
表 现 SSEA- 1 阴 性 , 而 小 鼠 的 ES 细 胞 和 EG 细 胞 则 表 现
( _! [& z/ ~* I/ b/ z S* g. _SSEA- 1 阳性, 因此, 常用单克隆抗体 SSEA- 1 检测 ES 和 EG
* r+ N4 ?! M" v6 A' l5 d' o g细 胞 表 面 抗 原 作 为 发 育 全 能 性 的 一 种 标 志 。 目 前 认 为 ,
( U$ C& P3 F. _& m, pSSEA- 1 的表达与否, 可能反映了相对扁平疏松结合的 ES 细
' t9 z' z# b7 _+ y' f, j胞 集 落 ( SSEA- 1 阴 性 ) 与 多 层 叠 垛 集 落 的 ES 细 胞 ( SSEA- 1$ f) ]0 q) E: G) b
阳性) 之间的差异。碱性磷酸酶(AKP)活性常被 用来作为鉴3 e. V6 O/ u" F! S, _. R
定 ES 细胞及其分化与否的重要标志。在早期 ES 中 AKP 活
+ s9 v$ y2 e1 f; a6 F4 _4 n' v) m性较高, 而在已分化的细胞中活性明显降低。
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: S7 e" U8 D J/ z4 g9 ]* ~4 a) c& z 转 录 因 子 Oct- 4 的 表 达 Oct- 4 是 一 种 发 育 全 能 性 的
1 Z6 ^! B4 K: z2 E5 R) M' x标志基因, 为 POC 区域的一个转录因子。在小鼠, Oct- 4 只限
3 f0 Y/ @$ q* n: ^/ i( b# [定在多潜 能 细 胞 中 表 达。, u$ }/ ]; l2 Q
& S& h+ E! N, }, | 体内外分化能力 畸胎瘤和类胚体的形成 |
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发表于 2011-3-20 21:03
谢谢- z9 X9 a& |! [! C
