求助：Lipofectamine 2000中文说明书

crystal

英文的我有了，看不动！
1 S4 R: w( q9 m-----这个很简单的嘛，很容易看懂，慢慢看！如果就只是想说这类-语言的巨人行为的侏儒方面话的请慢走！
# j# f' X0 L% [- ?: M$ r: o最近要开始做实验了，头痛死了！

jefferson

不同的细胞已及转不同面积的孔板操作起来略有不同，以转染六孔板的贴壁细胞为例：
) d! R$ @* P: q" S1 e0 L1 T% N1．接种细胞。转染前一天将细胞接种至六孔板内。细胞接种数量视其生长速度而定，一般为1×106个细胞。转染时要求细胞汇合度为90~95%。转染前两小时对细胞进行换液。
  l4 p; w, S7 d4 K& V0 Y2．将4ug的质粒DNA加至250ul的OPTI-MEM培基中，混匀。
/ B$ U" w: `3 K6 v% z. J3．将10ul的Lipo2000加至另外250ul 的OPTI-MEM中，轻轻混匀，室温静置5分钟。' C, d$ n1 o. i/ b% k
4．将DNA悬液和Lipo2000悬液混合，总体积500ul，轻轻混匀，室温静置20分钟。* O. C& D, R  _2 T: L. [) e
5．将DNA和Lipo2000混合液加至六孔板的孔内，前后左右晃动孔板混匀，置于培养箱中培养。- q' q7 C! G; W; O1 A
6．转染4-6小时后，细胞换液，每孔2ml培基。
( V3 i% m& r. b2 o) b! L7．转染18-48细胞后，收集细胞检测表达，或加入抗性培基筛选稳定表达克隆。. }! y2 k6 I4 u! H0 x* b5 M

4 B& T0 ^% Q6 {2 `* Y6 V" e: R注：1. 如果没有OPTI-MEM培基，用培养细胞的无血清基础培基替代也可以。+ G! D$ O3 K. T1 h1 k4 z# B7 U
　　2. 该说明为一个孔的用量，同时转几个孔时按需加倍。若转染其他类型孔板，DNA和Lipo2000用量参见试剂盒说明书中的表格。可根据实际质粒和细胞的转染效率，分不同量摸索最佳DNA和Lipo2000的混合比例。1 A, d' W$ O1 d% q' N
　　3．转染4-6小时后也可以不换液，但由于Lipo2000具有一定的细胞毒性，作用时间过长可能使某些细胞出现大量死亡现象，建议换液。1 L, \* V+ q' ~" B2 B$ M7 N( U

64627675

呵呵，不用我翻译了

gact

crystal

谢谢楼上的，本来我都没抱希望的，呵呵，收藏下来先！

做个好孩子

我们实验室也用过lipo2000,说明书要求细胞的铺板密度需要达到90%-95%，转染效率倒还可以，只是转染后飘起来的细胞太多了，最近计划用转染A549细胞