求教ES转染小RNA

歪歪

有人做过ES的RNAi实验吗，是否需要用无feeder的ES培养，用哪个试剂，怎么转的？

echowdk

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你的小RNA是siRNA还是shRNA。/ V" z% O* G5 f( ]) m; o  _
我就做过shRNA的转染，而且shRNA的载体是普通的载体，不是病毒的。
! M$ d2 S9 \+ Q9 \" g' a, p4 d我就用lipofectamine2000，跟普通的ES细胞转染一样。
6 }# \7 {# P+ a/ f; @  L铺不铺feeder都可以，看自己实验习惯，只要对照组和实验组一致就好了。
# r) J. H! e& v# Q! F要是siRNA转染的话，自己找paper看一下吧，应该有很多的。
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sciencezhu

请教下echowdk,最近mES养的状态很不好，是在Feeder上养的，能否给点提点啊？还有，如果转染或者感染ES，用什么载体效率会比较高啊？谢谢了
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fananran2003

回复 echowdk 的帖子: n4 t% x% U3 i

" \! ^7 K1 L# p' G2 I2 W$ h3 F请问一下你们ES的转染效率能达到多少啊?

echowdk

回复 fananran2003 的帖子8 O' v' |" u" Z9 _  m' I4 `" R

. P9 o& {7 F/ O! `3 e- g2 S! k* p% |用lipofectamine2000转染普通的质粒的话，效率很高，没有具体统计过，大概有90%+的样子。

秋槟茗

echowdk 发表于 2011-12-19 12:50 . i+ e. e) ?1 d! _" J4 e! i
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9 H. b) I% A! b/ l用lipofectamine2000转染普通的质粒的话，效率很高，没有具体统计过，大概有90% ...

! ^) z; F/ ]$ b请教老师，能否分享下具体步骤怎么做，谢谢，，

秋槟茗

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5 q/ {7 }% {: Y3 ~; X请教老师，能否分享下具体步骤怎么做，谢谢，，

张月儿

搜Efficient gene silencing and cell differentiation using siRNA in mouse and monkey ES cells这篇文章，写的挺详细的。

gscao

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6 T8 k9 p- |" B3 X  g7 @我们小鼠ES细胞转染效率远没有那么高，即使用核转染仪，转染效率也才达20%，我们用流式细胞仪分析的，这说明你在这方面是真正高手。你能否提供几点建议来提高ES细胞转染效率。谢谢！