免疫荧光染色步骤 越详细越好

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免疫荧光染色步骤的文章或视频     越详细越好 谢谢

moluxingke

看文章看视频，真不如在自己详细了解相关原理之后，动手做上一遍。然后再把遇到的有关问题请教其他人。

jenny114402

免疫荧光分为胞内核蛋白和表面蛋白
% v9 B& S/ r$ a& R! Y( i' k! z核内蛋白染色步骤：
' E3 D& N% ~2 P; q3 g. m1.在24孔板内接种细胞，1ml培养基培养，待细胞长到30%-50%染色0 i& J/ M5 T4 z; D2 e- N! M
2.吸弃培养基，PBS洗两次' d$ K1 R( n6 p. q, s: I
3.4%的多聚甲醛固定25min
& }) C' L/ f2 R& g% t4.PBS洗3遍
: b+ g9 ]& ]! f, v5.250ul 0.25%TritonX-100，室温20min
2 p1 g3 k/ t) Q$ w$ ?9 A& |6.PBS洗3遍9 b! {! T9 l" H" c! C- T9 j' `
7.200ul 10%的山羊血清，室温封闭30min/ E/ [' V: ^; Z4 E
8.弃封闭液，加一抗，避光4度过夜
* q' b  y7 h5 u$ h) A: D4 q9.PBS洗3遍
/ d  E8 }: q7 T; ~/ Q1 F# w  L7 s10.加二抗，避光室温2h
! A9 \- F- a# s. P& `; Q11.加稀释好的PI/DAPI，避光室温20min
0 B, S- c; {8 \" O. b# A12.PBS洗3遍，镜检。

jenny114402

表面蛋白省去TritonX-100打孔

1195963542

回复 moluxingke 的帖子0 h% O3 V% S. v2 P! Z
8 M3 m: q, \2 X
OK  
  `& I' z3 ]) @

倒腾细胞

回复 jenny114402 的帖子
. }( A3 M# _2 @$ e
- f$ o5 W" h- B* Q! I请教前辈 细胞量有没有讲究  现在在六孔板培养大鼠MSC 过几天想做免疫荧光看细胞fibronectin和iNOS的表达  第一次做没有任何经验！细胞爬片又是有什么用处。

jenny114402

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3 j" c2 S* G5 }; p1 X6 E* V1 h. o* P5 e! G) q7 g; M
我做的是人的MSC，细胞量是5*103， 第二天做的免疫荧光

jenny114402

回复 倒腾细胞 的帖子
: }7 k- Q' |$ d* F& u+ C+ j
0 s& ~1 k7 Q) \! \  g细胞爬片就是那个玻片是包被过的，有强吸附能力；说白了就是细胞不易洗掉。

jenny114402

回复 倒腾细胞 的帖子4 F! z, D3 t6 N  \
  R9 S$ Z" \, z" b, C4 s% c
我说的是5*103是24孔板的细胞量，我们一直都用24孔板做免疫荧光，检测mark有点多

倒腾细胞

回复 jenny114402 的帖子, P0 w6 D/ v3 p; e! p7 r* i* }

) R+ R0 B( {* `, b. N+ B9 J8 @: z8 M我得先用六孔板做transwell间接共培养24h  之后打算接着就用六孔板做IF  不过貌似细胞数量就很多了。。。。。难道要24h再消下来重新计数接种到24孔板吗？