免疫荧光染色步骤 越详细越好

1195963542

免疫荧光染色步骤的文章或视频     越详细越好 谢谢

moluxingke

看文章看视频，真不如在自己详细了解相关原理之后，动手做上一遍。然后再把遇到的有关问题请教其他人。

jenny114402

免疫荧光分为胞内核蛋白和表面蛋白3 L  [+ B9 z% n7 j  N+ g% \5 f8 c
核内蛋白染色步骤：5 J. X  ?" l5 V# v
1.在24孔板内接种细胞，1ml培养基培养，待细胞长到30%-50%染色
; m; c- g; C& e0 `3 T2.吸弃培养基，PBS洗两次' m; {+ [' J3 K( T3 u) v
3.4%的多聚甲醛固定25min
& J% o5 n' B  x- Q0 v" P* d! G- O$ A4.PBS洗3遍6 K0 q; N0 ^) j  E% C+ l
5.250ul 0.25%TritonX-100，室温20min8 o  s. ^. k* x9 W* @  n, A
6.PBS洗3遍
' h3 u8 w. {0 K7 v5 \3 a) m/ N  R7.200ul 10%的山羊血清，室温封闭30min5 _- D4 T) `/ L1 ]/ t
8.弃封闭液，加一抗，避光4度过夜
' g% }" Z  I, z- z9 _9.PBS洗3遍
6 x5 N0 @9 D# |0 @8 Q# C# Z10.加二抗，避光室温2h2 O6 q8 g- ^! I/ e  e3 X
11.加稀释好的PI/DAPI，避光室温20min
1 @- i4 o& Q4 V" P2 l7 _" n' o12.PBS洗3遍，镜检。

jenny114402

表面蛋白省去TritonX-100打孔

1195963542

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+ e3 x% k( Z/ ^4 J
9 G6 @2 B. s( X9 w$ T, iOK  
4 H" w* Z6 Y( }: n9 W* E5 B

倒腾细胞

回复 jenny114402 的帖子! A# f& ?9 S% ?- f; C$ t* \8 O

, W! C4 m6 c; r" w( Q0 X请教前辈 细胞量有没有讲究  现在在六孔板培养大鼠MSC 过几天想做免疫荧光看细胞fibronectin和iNOS的表达  第一次做没有任何经验！细胞爬片又是有什么用处。

jenny114402

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0 M: T: I/ U& ~5 A/ \: c# C  J4 }$ ]  q8 k
我做的是人的MSC，细胞量是5*103， 第二天做的免疫荧光

jenny114402

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) q0 e' ?2 Y% Q. e# p) U8 E  I7 D
" z5 u6 z" |1 b; m: X; Z6 D1 Z  Z细胞爬片就是那个玻片是包被过的，有强吸附能力；说白了就是细胞不易洗掉。

jenny114402

回复 倒腾细胞 的帖子8 B  b! l% e3 w$ C' Q6 {
$ S( V& N& b, Y! T5 d
我说的是5*103是24孔板的细胞量，我们一直都用24孔板做免疫荧光，检测mark有点多

倒腾细胞

回复 jenny114402 的帖子$ f4 _9 o& A) F. a6 F
- v# j/ z3 G2 \, {! T
我得先用六孔板做transwell间接共培养24h  之后打算接着就用六孔板做IF  不过貌似细胞数量就很多了。。。。。难道要24h再消下来重新计数接种到24孔板吗？