请教流式达人帮忙看图

baby00000003

先上图. i: j* e% i% q! ?9 a& w4 g

2015-5-21 14:18 上传

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* Z6 A+ @5 t* ]" o4 s# X2 w$ r! N

2015-5-21 14:18 上传

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+ a& |  }% f. f
这是同事做的1个CIK细胞样本，培养时间、条件、制样过程一概不清楚6 {- U8 Q/ ~* I$ y: ^& |7 s/ i
想请教各位有经验的老师们，为什么图上的细胞没有明显的CIK分群呢？
/ K* U' }! y% j图上圈绿色的一群是为数甚微的CIK么？! r' h" b& P8 ~6 n
图上红色的一群应该是细胞碎片吧？/ E+ M$ z- \+ p, I/ a6 W% E1 O  T
那图上蓝色的一群又是什么？
/ }; r$ O" f' z8 p( m8 R
% ?6 Z& l& o$ B追加信息：
8 e: a& O6 u4 [! n1 Y9 U$ }1，右边的图是CD3-FITC／CD56-PE的双标荧光，据说圈中图上蓝色一群几乎没有任何阳性荧光/ r/ `- L/ g; V
2，镜下观察细胞有非常明显的老化形态，如边界不圆滑，颜色暗淡。即使形态尚好的细胞也看不到分泌颗粒7 g: w2 G; g" {, u
3，细胞来源为健康的年轻人，无不良嗜好，采血前无饮酒、服药等行为) S+ y! Q# @: u
4，采样时间为培养开始后的D147 _, i% o& f6 U8 t7 p) R! }

2 N& K4 g4 M1 G0 c1 v麻烦各位老师帮忙解答～

元杰5

能先做个荧光补偿吗？……红色圈一般认为是碎片，绿色圈没有明显的参考价值，

Jonathan

SSC-A跑出去了好些。下次电压可以调低一点。

baby00000003

回复 元杰5 的帖子, B+ Q! S7 h  F# m* w

  H/ p. g6 }1 x; W" T9 y* H9 h1 y据说就是这个绿色的圈稍微有点各种阳性，多谢解答，俺会及时转告滴～

元杰5

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, `. {7 h3 n( u# _) D+ Z+ I2 h$ W, `9 R3 S( t2 M- h" d) o
我看的话，FSC/SSC图只表明细胞的大小、粒度等特性，跟是否表达某表面抗原没有关联

ccst4838318

回复 baby00000003 的帖子
% \6 b; @5 c3 d: M9 S- [& l
! I6 ?/ ?1 b, N绿色圈就是CIK大概的检测范围了，但是你这也太少了，基本上全是转化成其他淋巴细胞了，调下补偿和电压吧，效果图或许会好看一些，但是单看图片，你这DC-CIK诱导的效果是很不好，检测出来估计连10%都不到吧

lccsiais

嘿嘿，散射光图上圈了门，你FITC-PE图上也没有把绿色门的细胞单独显示出来，不好判断。另外图上阴性细胞群顶上那黑色细斜条都是死细胞/活力不佳的细胞，看样子这部分也太多了点。可以加个DAPI，sytoxblue什么的（405nm激光激发），染一下死细胞，把它排除（绝大部分）。- c' B5 y  @( o$ r' X9 a" v
不知道这是怎么测的，用561nm激光激发PE，不受FITC干扰，几乎无补偿了。

baby00000003

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$ H' \8 \/ m+ U6 a2 H
" I/ A; ?0 K) U, j* b5 d6 y多谢解答，俺会第一时间转告～

baby00000003

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- U! I5 Q7 }7 K5 n3 z. H" r2 R: V, r. O& v; Y$ j* g6 B* C- s
多谢解答，俺会第一时间转告～