小鼠骨髓移植整理 的 protocol 求 雅正

hyde

刚开始以为这个区是技术讨论区，后来感觉像文献交流区哈…- n! W* o6 ^& ?& M
准备练习一下小鼠骨髓移植， 整理了一下protocol ，不知道可行性如何 ？ protocol 整理.zip (5.63 MB)

2014-6-23 21:47 上传

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hyde

求实战者指导改正4 y& ]! H3 H: G4 C& M) Q

goblinwang

一只老鼠可以得到10X7的细胞，受体只需要2-10X10X5就行了，C57小黑鼠做尾静脉，难度大，手法需要练习，注射器最好不要用1ML的，针头太细，冲骨髓的时候，容易产生机械损伤，致死剂量照射，未处理的话，一周开始死亡，我是一次性照射10Gy,照射的时候最好密封无菌处理

hyde

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1 [$ ?$ i( m2 p1 i4 X+ T* G2 x# D$ o. `$ S9 T7 @; O, k" c
如果分离的细胞不进行流式分选出干细胞也只需要这么少细胞吗?

hyde

回复 goblinwang 的帖子8 g- z6 c$ p, H
. W. r3 R! R+ M4 w3 n
小鼠的性别有关系吗) Q, H! ^7 d$ N; g7 V

sysuhoo

按照我们实验室的经验，Co60照射与你的实验目的有很大的相关性，看你是做半致死还是致死，而且更重要的是剂量没有定论，一般来说体重和周龄对于照射剂量非常重要，我们的经验是20g左右，8周龄选用8.5Gy比较好。最后的成功标志以嵌合率在85%以上为成功。7 M4 H6 @! _: I" |4 j6 C- `
另外小鼠的性别对实验的影响不大。

hyde

回复 sysuhoo 的帖子. I! ?' f, u, Q; Z

! h0 I* j( G8 A6 i, `嵌合率如何判断？取细胞做流式分析？

goblinwang

回复 hyde 的帖子$ Y* A& r3 c* x( T# C" b
" W# r1 F8 h- g; _/ h
按理论看，每10X5个BMcell就含有一个HSC，而一个HSC就足够重建整个造血系统了，性别最好一致，不过获得的细胞含量，没差异，受体鼠，最好用公鼠，至于嵌合率，那你是用CD45.1和CD45.2老鼠进行BMT，这样也只能流式了& I9 U3 X( _! a8 H  ?4 p) M

hyde

回复 goblinwang 的帖子+ p6 c7 l! i3 A$ R

" D5 M' i' Y: y7 P4 m& M# U4 Y1，关于抗生素，国内外环境不一样，国内一般用的比较重的药物是吧，有什么推荐的？有文献说ph水太酸小鼠会不太喝。  需要每天换饲料换水吗？
/ l9 {6 m* D& e# r. y* O3 D2，有的文献说分离骨髓细胞的缓冲液不能加FBS，有些又可以，（最后重悬的不能有血清可以理解）-------我的理解是开始分离的时候可以有，后面快注射前的几步清洗就要去掉，防止对小鼠的影响？

goblinwang

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* C0 ]0 }# f. [- s; ]8 o- h- K  j0 r  j8 y3 Z+ B* I
抗生素，你看参考文献就行。这应该没什么问题，我的水不是酸处理的，不用每天换。FBS的使用，我的理解和你一样，