骨髓间充质干细胞相关问题讨论

wcforever126

小弟最近再做病人骨髓间充质干细胞培养，看了一些资料，分享一下' z- N: e3 ^6 M, l4 J
1、骨髓间充质干细胞在骨髓中含量很少，大概10的6次方骨髓单个核细胞中仅含有2-5个MSCs，故接种密度一般要在10的6次方；
7 n# t9 p: @  ^- E: d9 }. W2、MSCs三天后明显看到贴壁，48小时有贴壁，7天可看到很多梭形细胞；
# Z) e3 @, x2 @. O( x% n" K8 `* @3、液体培养基中的L-谷氨酰胺在你打开培养瓶盖时候大概2周会代谢消失，所以要记得2周用不完要添加
0 [3 W# b! T: e) d, d; T4、血清一定要分装，不能一整瓶今天化了，明天再冻；, b: I  R9 H: N
5、配好的培养基一定两周内用完，2-8度保存。9 i, |1 Y9 Z) q. g  h( P* s+ o) |
各位高手给些意见，及你实验过程中注意事项。

winstonsee

没有讲怎么分离的，什么分离胶？如何纯化，有没有做表面抗原鉴定

lindanmiaoyao

回复 细胞海洋 的帖子7 N/ T' A2 p/ j% C, @7 M8 v- ?

1 I: E/ b9 Z  n' b4 e& V好的，谢谢楼主

细胞海洋

回复 lindanmiaoyao 的帖子
( o' p: d& Y0 N5 l. a1 T4 M" J2 k: N5 y' r& W+ Q/ K
建议你发新帖提问

lindanmiaoyao

你们都是做人的BM-MSC吗？有没有做猴子的？

firstaider

从安全性角度出发BM-MSC我个人认为前景更好，当然必须是自体的，通过体外扩增的，目前体外扩增的技术都不怎么好，希望有人有更好的建议

wcforever126

回复 ffkkk2007 的帖子
5 n0 p% v# X  J3 p! m- D7 C( P& b4 T5 T; ?( i3 d- \' a! g
有利于贴壁，最好用进口的。

ffkkk2007

楼主精神可嘉，我也说一个：间充质干细胞培养应当使用树脂培养瓶，比用玻璃培养瓶的效果好很多

wcforever126

关于接种密度问题
! w; w3 A% _3 w' Z1、如果你用了细胞因子之类的，可以10的5次方/ml接种
' ?. `- d3 g( b0 S. O9 P2、如果没加细胞因子，可以10的6次方接种。

wcforever126

今天说下无菌观念吧
6 P) b/ t2 N) }0 w" f1、进实验室要换鞋，洗手，尽管您要戴手套也要洗手，穿工作衣，最好穿长裤到脚跟；
0 K. i7 [4 `" a" H+ `2、打开超净台紫外灯30-60分钟消毒，这段时间可以把分离液及培养基从4度冰箱拿出放置室温，30-60分钟后基本上恢复室温，不用再在水浴锅里预热，防止不必要的污染。通风10分钟即可开始实验。% e; |, s7 C! }* Y) E
3、酒精消毒超净台面，外拿进来的物品酒精喷洒消毒，至于是否点酒精灯的问题，保留个人意见。- z* t' k6 L$ F7 R2 q
4、操作过程中，不要混用枪头，最好自己的枪头前一天消毒，实验室人多混杂，注意保护。