人胎盘间充质干细胞问题？

hhxxattxs123

请问组织块培养法长不出细胞来是什么原因，还有就是组织块容易飘起来？人胎盘最好是新鲜的对吗？有人培养这个细胞吗？有的话可以介绍下您的方法吗？谢谢

grape

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8 {( i5 R- I# x" E0 V回复 hhxxattxs123 的帖子2 Q+ h/ ~- O3 E6 N7 B

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3 M3 ?, W1 E: t7 U, O5 I组织块容易漂起来一般是因为干烤时间不够。一般要烤1-4h不等。不知你目前烤了多长时间，再适当延长时间试试。
- }2 {' v- q2 e# m& b# h还有，将培养瓶翻转平放的时候要慢，以免液体冲击组织块导致漂起。' [) j, Z- k$ t
人胎盘当然最好是新鲜的，离体时间越短越好，最好不超过3小时。% g( A% G  X+ j4 I4 Z
我们一般用人脐带分离MSC。
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hhxxattxs123

谢谢哦，我的是用培养皿，用的是羊膜组织，就是剪碎了，也没有酶来消化就贴在皿上，等了20分钟就加培养液了" w: D0 E5 S: q7 Y- @5 H
时间长了，怕组织细胞死亡。

单个核细胞

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你可以先试试脐带华通胶组织块贴壁，熟练之后再行其它胎盘组织来源间充干的培养，贴壁时间适当长一点，然后再加入完全配液，这样有利于组织贴壁牢固。另外，也可将培养瓶倒置加液，待3-4h之后翻瓶，使培养液缓慢流遍组织块周围，然后放置培养箱静置培养。
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参考帖子：! n- [3 k- M% F# v
脐带间充质干细胞的贴壁分离方法：* m- l* R8 j9 C, x) c
http://www.stemcell8.cn/forum-vi ... rby%3Ddateline.html
) p* ^, y. M1 d( R; Y, ~- C! v请教华通氏胶的剥离：
% P* E6 P7 s& I5 W* b5 ihttp://www.stemcell8.cn/forum-vi ... rby%3Ddateline.html
9 ~) i, R: G+ Q- K- ]应用怎么样的培养技巧可以获得更完美脐带间充质干细胞：
1 J+ X+ \3 e1 rhttp://www.stemcell8.cn/forum-vi ... rby%3Ddateline.html
2 m+ x8 C% [3 b脐带间充质胶质的备置：
3 X5 k/ E$ n5 S/ Shttp://www.stemcell8.cn/forum-vi ... rby%3Ddateline.html# t" o$ Y$ B& }1 D4 F
脐带间充质细胞贴壁法出芽率怎么这么低：
+ o3 E1 r. B, dhttp://www.stemcell8.cn/forum-vi ... rby%3Ddateline.html% g  D2 D1 a, K
脐带间充质贴壁法到底几天换液：4 y! j  U$ H* k/ i7 z1 L) B
http://www.stemcell8.cn/forum-vi ... rby%3Ddateline.html! f/ m2 |; e: c' c+ V& r8 ~7 B) G# W

1 Q, ^! k% U6 c/ {, g参考文献：! A" ]( Q& V+ u6 s5 s/ U

单个核细胞

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2 m0 O/ I, J8 X7 E# n7 b+ I' A回复 hhxxattxs123 的帖子
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贴壁法培养胎盘组织时，可取小叶，尽量清洗干净（去除红细胞），然后充分剪碎，可用吸管进行贴壁。贴壁3-4小时候（可以过夜），补加完全培养液，加液和转移的的时候务必小心，不要让培养液剧烈震荡，避免组织块漂起，培养箱静置培养，以后观察时也需小心操作。# g9 I; f9 N0 c# P

2 z: v" n- m# E, h( G; C羊膜操作比较困难，太滑，不容易剪碎，其粘性不如华通胶，这就导致贴壁后很容易漂起，可慢慢摸索。

xiaolong

回复 hhxxattxs123 的帖子) e2 v2 A  F. d6 T8 O; T
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20分钟就加液时间太短了，1小时试试，可以参考一些华通胶贴壁培养的文献中贴壁的时间

hhxxattxs123

回复 单个核细胞 的帖子$ ~; y2 h  f" g% d1 B
3 z$ K6 \) j# T( I2 R- E( g
非常感谢啊，我最近在用你的建议来做，效果比以前强了呀，

回到从前

建议你还是选择胶质多的地方贴块，块尽量别太大，倒置2小时以上 应该可以 我们做过 就是细胞比较杂

sailree

说一个简单点的方法，在100mm培养皿中加上2ml培养液然后将处理干净的组织放在这2ml的培养液里，然后用剪刀剪碎后，平铺开放培养箱24小时后补液至10ml，一般约5-6天半换。10天开始观察细胞，并全换以后3天换一次液。

院士站

是不是加液太多