人T细胞扩增时可溶性CD3/CD28的浓度？

zerollx

   如题，想做人CD8+T细胞的体外扩增，添加可溶性的CD3和CD28抗体刺激，一般抗体浓度加多大啊？

xuanyalizi

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: q; Z1 n  z2 }4 pLZ解答非常专业，同问这个纯化后的T细胞是指经过分选后的某一亚群的T细胞吗？另外可溶性抗体的浓度是不是根据品牌不同会不一样吧，个人经验超过0.5ug/ml 就完全饱和了，50ng/ml左右的浓度效果也不错

woosheng

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请教下，soluble anti-CD3刺激T细胞活化时，用的不是分离纯化过的T细胞，而是PBMC的话是否只用anti-CD3（不用anti-CD28）就可以激活呢？

温暖暖

1、用immobilized anti-CD3抗体刺激T细胞活化（即包被），原理是固相结合的高密度anti-CD3抗体可引起T细胞TCR-CD3复合体的交联，直接产生活化信号，不需要第二信号的辅助。也就是说在没有任何抗原提呈细胞（APC)或anti-CD28等抗体的存在下，就可以刺激T细胞活化。% w' ~3 d* m7 u: i

7 d  R0 E/ C+ P# D常用包被抗体浓度是5 ug/ml或10 ug/ml，浓度的选择要根据自己的需要。如果培养时间3天左右，希望有很强的增殖可选高浓度，如果培养时间较长则选低浓度，因为高浓度虽然诱导增殖能力强，但活化诱导的凋亡作用（AICD)也很明显。
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* n% R3 b2 \$ Q" q! D+ E. U2、用soluble anti-CD3刺激T细胞活化，必须有第二信号的辅助。也就是培养体系中要么有APC，要么加入anti-CD28等抗体。因此，分离纯化过的T细胞如果只用可溶性anti-CD3刺激是不能增殖的，但用包被的anti-CD3就可以。3 ]$ O4 Z( h6 [( i" x
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常用的可溶性anti-CD3抗体浓度为0.5 ug/ml 或1 ug/ml。在我手里，有APC存在的情况下，二者刺激T细胞增殖能力没有明显差别，所以我认为0.5 ug/ml 的浓度已经饱和了。Anti-CD28抗体的浓度与anti-CD3一样。1 b8 M) H/ `3 v2 E% R% @
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再次强调，如果想长期培养，除了适当加入IL-2外，初始刺激一定不能太强。

nailute1985

CD3不超过50ng／ml，CD28不超过30ng／ml