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目 录
8 c9 C; ~ p: r% {* a' M; \" s转染选择指南和转染决策树 . . . . . . iiii
) _. ^4 _$ `! s9 r& D8 l0 H4 q1. 简介 . . 1
/ I" Z& s9 t) H7 d2. 转染基础知识 . . 2( h8 d/ Q+ k& q5 u7 e1 @' |
转染介绍 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2, N: _5 x6 C1 E0 _: H
什么是转染 2, @) I: K1 d% r1 j
术语 2
* f, B& A9 j+ _* L5 A应用 3
: D9 K, G7 y$ j- a: b8 U3 o4 M转染类型 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4
5 _ z( A" n2 Y: G1 L2 c瞬时转染 4
3 ` @! O2 Y, b! @: B0 M/ D- O3 ?稳定转染 4/ K' t R$ `; P! z" P
选择转染策略 . 5
# ^9 N* m2 l6 @基因输送技术 . . 71 f9 f% F8 w8 w; K# m0 L
阳离子脂质体介导的输送 9
0 T4 }6 l3 B" f; K9 H/ t4 k磷酸钙共沉淀 10
+ Y' F* _4 `; L ~3 D7 Y' q- jDEAE-右旋糖酐介导的输送 . 11, h, h5 q$ v3 `0 H8 ^) k3 O9 Y
其他阳离子聚合物输送 . 120 ^1 G# }& T3 |/ \
病毒输送 135 E7 b; L* [+ K7 _
电穿孔 . 14( C6 Q( K$ N% P
其它物理输送方法 . 15( N/ e, Z. P9 s* r, r7 k
阳离子脂质体介导的转染 . . . . . . . . . . . . . . 169 y7 s) u. m3 l* m; e3 F( k
机理 16* D, {4 j8 q, @5 X, v+ Y4 d" Q! {
阳离子脂质体转染试剂 . 173 v1 D* q' T9 _ g/ {2 b4 Z
病毒介导的基因转移 . . . . . . . . . . . . . . . 19# s( f" @ \( I c4 Z( l
病毒载体的主要特点 . 19
$ {% m$ L" [7 c$ \' H$ O- n常用病毒载体 19+ K* ]2 x( _5 y4 L# t% x
Neon®转染系统 . . . . . . . . . . . . . . . . . . 21
4 l$ ]: ?9 x2 Z3 ]% z- A稳定转染子的选择 . . 23% p# I, I. i/ v& d) g# F& |
用于真核细胞的选择性抗生素 . 23
- J; d. I6 @/ t报告基因分析 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 240 E# p) n+ J) Z/ a
转染分析 243 e( p9 V5 a; }/ j
基因调控分析 25( R2 ^2 g7 H- y @6 t0 J
常用的报告基因 25
5 L1 N9 u7 r- P& X# r/ fRNAi和非编码RNA研究 . . 26
: \* j9 n9 {, m4 r. G# l- [常用RNAi术语表 . 266 Y# b) d$ \* ]" E( }, r( _1 p9 d8 @
RNAi工作原理 . 27
, N3 P# B9 ]! g) d q9 a0 `siRNA分析 . 27& O" v8 b# X" m' _! W
miRNA分析 28& B. d% @* y9 O5 z% R/ e
选择RNAi方法 . 29
) T" \4 }1 ?% x" [3. 转染方法 . . . . . . . . . . . . . . 30) `% r! y3 V" e0 ~
影响转染效率的因素 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 305 t5 x& n. ]9 b# m) w: G! A) m
细胞类型 302 h% Y7 G" [4 Z8 }
细胞健康与活性 31
# F8 s' y: Q5 k4 o9 W, j+ p0 J汇合 . 32
# d- X' ~8 t/ C0 A1 Z1 P培养基 . 32
% x0 w& q# i& m3 a血清 . 323 z K- H2 w4 o( z; d; _9 a6 H0 O
抗生素 33
) z2 ]9 e4 I, r转染分子的类型 33
$ t1 b+ U. F) O2 Q! v2 m& U转染方法 33
; s9 d$ o K; }- Q" A选择转染方法(非病毒) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 34
/ t7 ^# E# ?! v9 K, |& G连续细胞系 . 340 y3 y, R5 ^0 A9 T
原代细胞和有限培养物 . 35* Q0 C t" @: u9 t O( K
选择病毒DNA输送系统 . . . . . . . . . . . . . . . . . . 363 m/ X6 g. T! R$ s
哺乳动物细胞表达系统 . 361 h; l% J5 j7 e# K1 {
昆虫细胞表达系统 . 378 e/ {2 ?3 w$ h! V$ V3 X0 u7 {
质粒DNA转染指导原则 . . 38
( r+ ~8 ]7 G$ k* i8 c载体考虑因素 38
: y6 w5 ~& F( G, B质粒DNA的质量 388 P$ X) H( o$ c" U
基因产物和启动子 . 39/ u$ |' Q" ?0 b/ S5 z
对照 39; ^7 y3 N0 q m% S- E/ z7 I8 f
质粒DNA转染的优化 . . 39
# b) L1 L9 S; I# N n9 g磷酸钙共沉淀的考虑因素 . 40
& A* D$ i% Y7 S, C! ]. ]" P阳离子脂质体介导的转染考虑因素 41* m( _" F$ V3 x0 U
电穿孔的考虑因素 . 435 v- Q3 c0 V$ ?) Q5 f
稳定转染子的选择 . . 44
J5 W! L" K6 y& b, H8 {开始前 449 g8 x4 j" E9 `8 h; S
杀死曲线 44& y4 D0 a) {$ y' A+ c. M% j6 F
选择工作流程 44
' B+ g* o" @" X) _( E: i7 U' N( H选择RNAi策略 . . 467 L- F" V/ g! @$ s: w
siRNA与载体方法 461 c+ `# |) A) D# }) E- `4 M8 Q
非载体siRNA技术 47. {$ i z$ X8 C: u( Q4 @6 A
siRNA转染 . 49/ Y# ~5 a* y7 U X, m; j* I( w
载体介导的RNAi . 50, J" W: O+ N) W2 g9 v9 ~. |, e
RNA转染指导原则 . . 51
9 Z5 ~* ^; c" A: C2 f7 u4 ARNAi工作流程 . 51/ K* c7 P1 Q4 x t1 a
RNA处理 521 _# V' K q9 a; c
转染效率 52' o7 t& O ]) d+ U
阳性对照 . 52
( K* ?2 Q5 ?! G7 `2 p; I阴性对照 52( B" S ?; k& Q* t( |- b
共转染 53
; Q# Z# c& V3 g# c3 BsiRNA质量 . 53
- `% E1 g! y6 J, w) c1 H2 c' IsiRNA用量 . 54
) V1 w4 J) Q7 Y! A' S+ Q. W转染试剂的体积 54
/ j/ W+ ~$ K$ l3 F* n细胞密度 54" T+ C1 u* l# \
暴露在转染试剂/siRNA复合物中 . 54
- y @- ]- B& K( t转染过程中存在血清 . 55
, M( F a# }, [) gsiRNA实验成功的技巧 55
$ ?6 d$ H: W# P' msiRNA转染优化 . . . . . . . . . . . 56
6 k/ _3 G% }3 c5 [ F影响siRNA效率的因素 56) g9 t+ Z" N& o0 g; H# Z& D
附录 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 577 Y8 V5 ^ U& C1 T* X. q
转染产品列表 . . 57
7 z3 S" l+ E1 n& N: f9 Z转染试剂 57, I) a: I# X* T7 o: q
Neon®转染系统 . 58# d u2 p; U# S0 k. q) x
RNA干扰 58- Q7 h3 o, l2 L- r/ ~
参考文献 . . . 59
+ r* g5 b3 @, { |
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发表于 2015-7-9 09:28
