如何浓缩慢病毒？

sizhengliu

我要做慢病毒转染，现在想自己来浓缩慢病毒，看了一些资料，发现病毒浓度不高，浓缩是一个关键问题。我在的实验室有4度离心机，目前我还没有买任何试剂。请有经验的朋友路过指教，我怎样比较有效率的浓缩慢病毒？还需要什么东西呢？不胜感激！！

daviddow

超速离心，大约32000rpm，3个小时

sizhengliu

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! E- U( R/ m6 [9 A
9 z$ ?$ B$ _& D; @) @谢谢！用你的方法，你能得到的滴度一般是多少呢？

huangcong1988

  病毒的收获及浓缩! `* R3 g+ z7 d1 [; O' W4 s
（1)收集转染后48h（转染即可为0h计起）的293T细胞上清液。
2 x, W: }' g! L5 \7 C（2)于4℃，4000g离心10 min，除去细胞碎片。
3 f3 \' Y# R& ?5 ^- ?（3)以0.45μm滤器过滤上清液于40ml超速离心管中。
' p2 S0 ^( ?! p- m  h. W（4)把病毒粗提液样品加入到过滤杯中（最多19 ml），盖上盖子。将过滤杯插% F  W& w" z$ a+ y, o/ V
到滤过液收集管中。
0 l* ~! Q! Q# M& P& K; B（5)组合好后，做好平衡，放在转头上。9 j, I+ C* s+ b! m4 |) u
（6)在4000g离心，至需要的病毒浓缩体积。通常需要的时间为10-15min。
* Z" j" a  Q5 w* x（7)离心结束后，取出离心装置，将过滤杯和下面的滤过液收集杯分开。, ]0 @. a1 E4 v2 D, T, V4 n# [1 [: S
（8)将过滤杯倒扣在样品收集杯上。4 ?4 `5 v3 i) j
（9)离心力不超过1000g,时间为2min。过高转速会导致样品损失。把离心杯从3 x- t' ]$ ]; Q( K. N
样品收集杯上移开。样品收集杯中的即为病毒浓缩液。( E$ b& v0 c+ I; x
（10)将病毒浓缩液移出，分装后保存在病毒管中，-70℃长期保存。取其中一支
. u( B9 F' p( W9 s% u进行病毒生物学滴度测定。6 [* f4 S, Q7 O& H

shihuijunm

超滤管就可以，但滤膜是100k的，Millipore的有卖

daviddow

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+ V; E: ]8 x, C4 W8 r! H) Y
过滤杯是在哪里买的？还有收集管？谢谢

huangcong1988

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7 K& l5 g: y) c% Q2 S
. N& t6 S; M# L; f% `' ^( g: L) D- ^在一般的试剂耗材公司应该都能买到

daviddow

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% q: _' n& ^( ~, }6 M0 Y' ^* Q( V/ t; q" U
国内的公司有吗？价格

huangcong1988

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7 G9 e5 Y" f1 j' U* U& ?! I5 n. {/ t+ i6 m- Q
这个不提清楚，呵呵，应该是不贵，耗材

wangyimei

如果有条件可以用BECMAN低温超高度离心机，26000rpm 2hours ,然后倒掉离心上清，可看到白色的病毒沉淀，再用PBS重悬