第三天（8月17日）中午观察细胞，并消化传代

泡沫清风

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7 O  K3 y9 I, U9 [第三天中午，差不多复苏后50小时左右，观察细胞
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不同的实验室消化传代的方法不同，我的方法可供参考：9 ?3 s% Y; [9 o3 U2 D

, o' j+ ?# n; P; s' C实验前准备：( W4 j  J/ d; K( |# p
（1）DMEM+10%FBS. ^! W! ]7 Y& {/ M) K3 B
（2）PBS' B( U- h+ A' Q- [9 ^. v# G
（3）0.25%胰酶
# N! C9 P, ]+ W0 _7 }; _0 l（注：同样这些试剂要平衡到常温再做实验）
) F5 s, V7 |9 }. {9 Z6 `8 e! x7 ?) b- Q$ B
实验步骤：4 f& a: ?" T5 E; P+ ?
（1）弃去T75瓶中的原液。: O! ^& ]9 m% \; M7 R  M
（2）加入5mlPBS洗一遍，洗去残留的血清。* ~5 j7 E9 T( q) P) v; Z
（3）加入3ml胰酶，大概常温放置1-2min。; N7 t# p7 Z5 R3 @! S* U
（4）加入6ml新鲜培养基中和胰酶，并轻轻吹打内壁上的细胞。
% p0 ~1 N( h8 f% b$ Q（5）将内壁上的细胞吹打下来后，充分吹打细胞液，使其成为单细胞悬液。不过也有老师和我说不成单细胞关系也不大，3.4个细胞成团没有关系。因人而异吧，呵呵。我一般吹打50-100下。自己看着办吧，也有人吹打5-10min。
+ [" J' g; r2 h2 C（6）吹打成单细胞悬液后，转移到50ml离心管中。1000rpm 常温离心5min。, ~. ?" _6 ^$ ~0 s# ?& a
（7）离心期间另外准备两个T75瓶，加上原瓶，共三个T75培养瓶，分别向瓶中加入10ml新鲜培养基。离心后，用15ml新鲜培养基重悬。充分吹打后，平均转移至三个T75瓶中。混匀。' Z8 K* g/ M/ F  R- `  X% a! X; L
（8）放入温箱培养。
( w: j! W  `* R5 s5 Z8 v(注：我一般一个T25瓶长到80%左右传到一个T75瓶。而一个T75瓶长到80%左右传三个T75瓶，也就是1：3传。)

have-a-rest

有个问题，293培养基中需要添加丙酮酸（钠）吗？抗生素呢？3 Z! u# h. Z. l  b9 n
一点建议：胰酶里面添加一点EDTA，也许就不需要吹打那么长时间了。

hualin840518

good

hualin840518

图片是用成像系统还是相机照的？

mvirus008

持续关注

mvirus008

有个问题请教一下：! ]; C' I" |3 x$ B
这个细胞传代能否简化一下,(胰酶消化后直接加培养基把细胞吹散分装，省略掉离心再加新培养基再分装)，不知道这样行不行？

难得胡涂-1

能不能消化后先倒掉胰酶，加培养基再吹细胞？这样也不用离心啊！

泡沫清风

7# 难得胡涂-1 * t0 _0 n) ?6 i$ ?
把问题发在疑问贴里吧，这样我不用找。我的回答请到疑问贴去看吧

chenghoby

好的

轩辕之客

支持下！！！！