第六天（8月20日）上午，接种质粒包装病毒

泡沫清风

' A" i5 _: n7 \/ f2 D' R/ M% x8 d$ n6 h6 t
铺皿后19小时左右，观察细胞密度：
# I' Q; [! m6 P0 O( h) I2 \9 |. J

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: q/ g6 E$ K$ \$ A5 L  a) X6 s/ f
9 Y. o! P/ D9 j- G实验准备：
7 D4 j8 K% o5 B0 `1、培养基：DMEM+10%FBS
$ c' T4 V3 C% c2 c2、lipofectamine 2000 （invitrogen）
/ K; J6 a/ \  s3 I. o3、OPTI-MEM （GIBCO）
( ?+ X' n2 P* S0 `8 \- ~4、质粒9 M0 X5 G3 V3 Q7 u3 w
   两个目的质粒：MSCV-BCR/ABL-IRES-GFP- J# g4 [1 z$ E- V
                        MSCV-IRES-GFP
) O- j& d- u: t) M1 P! e% p- l& K1 W    两个包装载体：pKat和pCMV-VSVG8 a6 R+ x: F+ x! V# `4 Z. S

- h1 v4 d. M5 ?1 [实验步骤：
. \; @9 m# V+ u& J7 q1、弃去6个皿中旧培养基，各加入4ml新鲜培养基。# A! `3 u" M0 y2 W
2、制备质粒-lipo 2000混合液：' w' Q. U% {6 \: n  M8 j( i
（一个10cm皿我用质粒的量是10ug，lipo2000的量是20ul，OPTI-MEM 1ml，6个皿中其中4个皿用来转染MSCV-BCR/ABL-IRES-GFP，另外两个皿用来转染MSCV-IRES-GFP作为对照）9 X+ C! m, F. A) x/ O1 k2 G6 V

2 y1 F0 v. k+ e0 @; p  （a）取一个4mlEP，加入120ul lipo2000，再加入3ml OPTI-MEM，混匀，室温静止5min。（6个皿的量）
* A: K( S3 ^! A2 Q7 u1 |4 a3 b   （b）取第二个4ml EP，加入MSCV-IRES-GFP 10ug，Kat和VSVG各5ug，加入1ml OPTI-MEM。（2个皿的量）
8 [/ Y) x$ A- Z7 o: n5 w  （c）取第三个4ml EP，加入MSCV-BCR/ABL-IRES-GFP 20ug，Kat和VSVG各10ug，再加入2ml OPTI-MEM。 （4个皿的量）
3 c4 U9 r/ e; Z0 g& ]' A: s7 N  （d）取（a）中1ml于（b），其余2ml到（c），混匀，室温静止20min7 B! m$ e3 ]- u2 K
3、在1-4皿中加入（a）与（c）的混合液各1ml，5-6皿加入（a）与（b）的混合液各1ml，注意一滴一滴加入。这样每个皿都为5ml总体积。
9 J  L$ x3 p" Y4、放入温箱培养，到6小时时换液。

董董董

啊啊啊

小花花1128

谢谢

郑卓越

学习学习

拉二胡的拉尔夫

看一看

veda327

这个好贴啊！

UlissesJR

学习一下

wenly

不错，真心觉得学习了很多！

Liyun65

学习中

Llxue

学习