请教关于脐血CIK细胞增殖团与CD3，CD56双阳性的问题

bloodroses

小弟刚刚接触CIK，养外周血CIK时，增殖团的数量和体积都相应增加，第7天双阳率是10%，第14天到了50%。2 I2 u: a) p5 R, B8 ^$ I% k
诱导方案是INF-γ 1000u/ml, 24小时后加CD3 50ng/ml, IL-2  300U/ml，之后2~3天半量换液，补充IL-2到300U/ml。
! C! G* G- P% |, M5 }培养基用国产无血清培养基。分离液是Ficoll 1.077。; _* k7 g+ v, r0 g
可是养脐血CIK时，分离方法和诱导方案以及培养基都相同。
9 g: N7 M, x7 S5 t8 O) j' L2 O( H第3天的时候，可见少量增殖团生成，到第7天检测时，双阳率在0.5%以下，3 a) H% @% i9 t# B) i4 z" _7 s
之后培养基又用PRMI 1640+10%FBS，以及在培养基中加10%自体血浆。
& v2 C8 O" e. r/ S: T7 h重复4次试验，都是只见增殖团，流式检测时，双阳率都在1%以下。+ n$ f  M1 Q: D8 [: x+ a& ?
恳请高手帮忙分析一下原因啊，谢谢。

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回复 liutianhua 的帖子% ~; b, t" r1 a3 \# {2 H
4 e/ q% m0 A* W0 d
谢谢您的回复

bloodroses

回复 莫邪小仙 的帖子
# \  j" J: r! T0 G5 I2 l7 }$ g% t; a; |. N' g
请问脐血CIK诱导方案你用的是什么啊？

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回复 莫邪小仙 的帖子
+ M6 }& d6 e4 O  l" m9 s6 s* ?& U! o/ W4 N# W7 p4 T$ J3 M
我的没有加IL-1，而且IL-2的浓度也只有300U

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回复 lyd20042004 的帖子7 v1 G" F4 G1 _& y5 [( L

' U7 W7 `3 G& g& m目前的数据只是个例* f/ q4 {6 T6 w! |. y
数据还在积累中，平均值是多少，现在还不好说

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回复 sunny.yc 的帖子8 M4 ]; `- y9 G: K" _$ J

$ t2 K- Q# y% y+ J$ l: O+ |养外周血的时候，是用的国产无血清培养基，没有加血浆或者血清。" N8 O* |. |4 ]3 {7 q. }
养脐血的时候，不加血清，只加10%FBS，或者只加10%自体血浆，都做了单因素考察。可是还是没有双阳的细胞。

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回复 kiss2346 的帖子- E. d. R' S: j; F1 v4 O# ]  o
0 G4 [$ l1 c' m! r
外周血是正常人的血，没有炎症也没有癌症。
) P/ H4 {) |6 f( L% r9 f  s& ^请问你用的脐血，采血量是多少啊，血袋是多大容量的，抗凝剂是的成分和量是多少啊？
: F/ l: [4 Q" Y" D; l4 J谢谢。

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回复 kiss2346 的帖子
4 a" O$ n! {' f4 [. E0 k
" w* ]! n$ k: s6 r6 \) e非常感谢您的回复。

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回复 gejianyun 的帖子2 G# m" x( d' c9 u) t5 q

, q) J+ A4 b, n; c! p; m换液的时候，我只加了IL-2

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回复 wind789 的帖子/ l' W2 @" X6 m2 y( w
! E- p( K  r% {; g( h
用的是200ml血袋，抗凝剂是枸橼酸钠，采血量大概60~80ml（含28ml抗凝剂），一般室温放置30~60min后开始离心。