关于UEA染色的问题

Diane0321

实验需要标记epc，想做个UEA染色，想请教一下各位，是消化成细胞悬液再染色，还是直接染贴壁的细胞呢？这两者各有什么优缺点？染色对细胞的影响大不大？会造成细胞死亡吗？染完之后荧光能持续多久呢？以下是我准备的实验步骤，还请大家批评指正，谢谢！
" L" |/ ~. Z1 h6 v* _  y(1)        用TrypLE酶消化EPCs；4 a4 a" j8 _+ p5 d* k9 C  K  q  B" u
(2)        用2ml DPBS将消化后的细胞洗涤一次；" d# j: R4 s! r- ]
(3)        将收集的EPCs悬于UEA染液中（染液浓度为2.5μl/ml）；
1 B6 J- g! Q8 O& j(4)        室温下避光染色30min后，用DPBS洗涤两次；. w( W8 ~: q. S  a
(5)        将细胞重悬于培养基中。
) D: [3 v0 a8 n8 V

honey棉花

想知道你的目的是鉴定不咯？直接染贴壁细胞就可以了9 c5 a7 |% n6 |6 |) F3 Y2 x
1、体外培养EPCs 至80%融合，弃去培养基，用DPBS 洗涤一次# I5 \6 H0 |" ]
2、按照1:400 加入UEA-1 染液，37℃孵育20 min （按试剂盒操作说明）6 \9 s! A/ P; X
3、弃去染液并用DPBS洗涤一次后，加入1 ml 4% 多聚甲醛固定液固定15 min 后/ E% B! U) \) n7 Z
4、弃去固定液并洗涤一次后，加入1 ml 按1:20000 稀释的DIPA 染液染核3 min，2 W4 P+ A, {8 c
5、荧光显微镜下观察拍照。8 G% m; N: l+ P  q  O" ]; b2 g
在荧光显微镜下可以看到鹅卵石形态的EPC结合UEA-1而成红色，如果不需要染核的话，可以在第2步就进行观察了3 D0 K3 e5 C8 f7 G! b
希望对你有帮助

Diane0321

回复 honey棉花 的帖子8 C8 ~6 u: @8 y# {4 H
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嗯嗯，非常感谢你的帮助