关于NK的讨论

ljl1988115

不知有没有做过NK细胞的同学，不知道大家是怎么养的？希望做过的同学能解答一下，我看文献上有用滋养层细胞的，不知是什么情况，有做过的讨论一下吧！

wwxx66

国外做的很多都是用饲养层细胞养的，K562细胞经基因工程改造，可以表达一些膜分子，在膜分子的的作用下，NK细胞可以大量的增增殖，最大扩增倍数可达到21000倍！国内也有很多专利讲到这些东西。你可以去国家专利局网站上查找。

weijunning

可以不用饲养层；选用德国产的一种用于NK细胞培养基（比较贵，2000元/瓶，500ml/瓶），选用关键细胞因子IL-2，OK432，可以进行很好的NK细胞培养。

永远的伊凡

回复 weijunning 的帖子0 p4 h; b( y2 ?) O. p6 t/ o% e

# h/ K3 |. ^$ ^) V! x8 g& B7 X" E能不能讲具体点呢，像需要加的因子的量、加的时间先后等等

yangpan521

回复 weijunning 的帖子" M# Q: \3 M- B  `

0 I* V7 Y5 ^4 {能不能发一些相关的信息呀，比如饲养层的选择、因子的浓度等 最好有相关的文献 谢谢

weijunning

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3 q2 P, p8 R5 Z4 E, z7 P3 s
2 f% x8 F/ I- l* N# k& N# U9 {* bOK432有配套的溶剂去溶解，1g用一支配套的溶剂去溶解就行，配出来的是1000X母液；需要铺细胞当天加；IL-2的工作浓度为1000ug/ml  在当天加；之后扩瓶培养基只加IL-2因子就行。

永远的伊凡

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很有用，谢谢！

zhenhuale

回复 weijunning 的帖子
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我用德国的培养基和OK432都试过培养  有文章也报道过该种培养方法  ]9 x& G' E: c" v/ v8 L1 Z$ J0 E
但是培养效果不理想，请问您培养多少天可以得到多少的细胞量，CD3-CD56+比率多少？谢谢！

weijunning

回复 zhenhuale 的帖子9 w& @# \3 @! N7 ^) h% m7 S& F
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我们正是用此方法培养的NK。一般在第10天才开始进入快速增殖期，之前增长比较缓慢；由于其对数生长期滞后，回输我们定在第15天，这时细胞数能达到2.0X109左右。CD3+CD56+一般在35%左右。

ljl1988115

回复 weijunning 的帖子( \6 a- D' w+ F. M* @2 a
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NK的表面标志抗原应该是CD3-，CD56+吧，双阳的话不就是NKT了吗