为什么G418筛到的阳性细胞 ，扩大培养后阳性又丢失了呢？

yangpan521

给位大侠，谁能解答一下，电转后，用G418筛选细胞，挑出的克隆初步鉴定时是阳性，可随着扩大培养，阳性细胞就丢失了，这是为什么？这里说明一下，在刚刚挑到克隆时为了能够使细胞快速生长 ，就选择培养基不加药（G418）培养一天，之后都是半量加药德培养基培养，可穿了3代后，就检不到阳性细胞  ，不知该怎么办

moluxingke

首先，你确定你筛到了你想要的细胞系，不是假阳性出来。另外一个常见的现象是，细胞转入外来基因，给生长带来一定的压力，为了生存，生长过程中这些外来基因可能会慢慢丢失，你G418加少了，这些丢失外源基因的细胞也可能生存，为防止影响后来实验，早起挑克隆扩增后，需要多保存一些，以备不时之需。但是如果是才3代就没有了，的确有点早，或者你转入的基因片段比较特殊。