求助，原代分离羊膜上皮细胞不贴壁

听不到

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* W8 j+ |7 F  ]) y/ _那你们消化步骤是如何呢？重复消化吗？我怕我消化时间太长

alicia_86

我们用胶原酶消化的，个人也同意楼上说你培养基的问题。。

听不到

回复 alicia_86 的帖子7 |2 D# }. w! E, [  g! S

( W) \% b+ G% E3 p* m胶原酶消化下来的不是大部分是间充质吗？培养基应该没什么问题，像EGF，血清这类必需的培养基里都含有了

coffee.cat105

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# Q+ K& l6 |- V" Y1 B
& J- t2 R! z# @1 j# ?9 _请问能不能描述一下您消化的是哪个部分的细胞，我揭了胎儿面那一侧的薄薄的很有韧性的部分消化，从来没有消化下任何一个细胞下来，间充质都没有，一直要消化到靠近绒毛的地方才能有细胞，可是消化下来的还是羊膜上皮吗？3 {- h  n" S% ^9 V, C
还有我的细胞原代长的很好，很快，可是一传代就停止生长，是为什么啊？
7 M, o& \$ q( @

qiaozhong.9876

回复 coffee.cat105 的帖子3 G2 p4 z  @% n; m
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我选取的是胎盘的胎儿面侧的那层薄羊膜进行消化的，那层细胞我们称之为胎盘亚全能干细胞，不知和你的是不是同一种细胞？我不知道你的那层羊膜状态怎么样，状态好的羊膜可以消化下好多细胞，有时候能达到10的9次方，这主要取决于羊膜的质量，这是我个人的经验，有的羊膜胶质比较多不好处理，还有就是要新鲜的羊膜，不要运输时间太长。关于你细胞传代不长，我觉得原代长的好的，传代也应该没问题，不知道你这种情况只出现一次，还是都是这种情况，如果都是这种情况那就麻烦了。

qiaozhong.9876

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6 n- f' J0 d3 h( Y. |6 l
; w- I5 _1 B# m- e. v我是新手，没有权限加你好友

coffee.cat105

回复 qiaozhong.9876 的帖子# n( Y( n+ _+ t# }' C8 G
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胎儿面是指胎盘拿到以后脐带的那个面的第一层吗？我消化过那一层很薄，上面很多东西，轻轻一消化就会掉下来，但是没有细胞贴壁，是我没消化对吗？
7 I) c0 G  Y8 S) E我都要消化到靠近绒毛的地方才能有细胞，这一层就紧贴着绒毛，又怕细胞种类不对，特别是它还不能传代。1 W. B; {$ A* x
你们一般是消化的胎盘上的羊膜还是胎盘周围的羊膜也可以啊？

coffee.cat105

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1 P; A( c6 m& p# t% k2 r' Y8 H. b3 h! {
都是这样的情况啊，是不是细胞不对，您做这个要用胶原铺板不呢？我会先用没有铺的板把间充质先贴掉，在把上清转种到胶原铺的板里，这样做对不对呢？

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回复 qiaozhong.9876 的帖子& b. D7 u4 m5 M# _1 _' s
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我想问问你，你取得的羊膜是一层特别透明的吗？我最后取的是一层很透明的，特别薄的膜，我选了那个进行消化，贴壁了倒是，但是明显不是细胞，不知道是什么，碎碎的，我就怀疑我取得这层是不是不对。我是用载玻片把带血的一面完全给刮掉了，然后剩下一层极薄的近乎透明的膜，特别容易破

听不到

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* ~$ ^: W2 [/ ?& U1 T' D要用胶原铺板吗？...我是直接种的，但是不贴壁...