胚胎干细胞体内分化能力的检测

ciweiyuan

收集15代以内的两个10 cm 培养皿的iPS, 当生长于饲养层上的iPS 汇合至80 %～90 %后,用0.125 %的胰蛋白酶(含0.05 %的EDTA) 消化并吹打成单细胞悬液,置于预先用0.1%的明胶包被好的培养皿中,37 ℃,5%CO2 培养40～50 min ,吸取上清,1000 rPmin 离心,10 min ,加入一定体积的含20 %胎牛血清的DMEM重悬以去除饲养层细胞, 大约1×107 个细胞. 注入5 周龄的免疫缺陷(SCID)小鼠大腿皮下. 3-4 周后, 检测畸胎瘤的形成. 采用HE 染色方法检测畸胎瘤三胚层分化情况.

kasaya

这个还蛮初级的，更好的检测是利用小鼠囊胚或二细胞电融合做chimera或者tetra-aggregation的检测，子代小鼠的出生率嵌合率，以及子代和ICR交配的小鼠携带标志基因的比率更好的数据说明细胞的多功能性。

Jonathan

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8 g3 W  k$ v( T* @
+ U2 A: f& @  q, S3 N# o( |$ M人家还没说是人的还是鼠的，你就这么急于回答了啊。。。。

kasaya

回复 Jonathan 的帖子3 h2 ~+ E: }/ F3 s3 P

  V6 ]& |5 X% _0 h2 N" j/ H  u" |是人的吗？如果是人的,除了养EB球，在nude小鼠体内打畸胎瘤之外，还有向三胚层的各种系统的progenitor或者终极分化的体细胞进行体外诱导分化，会比较麻烦。没有注意到是人是鼠，不好意思啊。