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胚胎干细胞体内分化能力的检测

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金话筒 优秀会员 小小研究员 热心会员

发表于 2014-4-11 11:07 |显示全部帖子
收集15代以内的两个10 cm 培养皿的iPS, 当生长于饲养层上的iPS 汇合至80 %~90 %后,用0.125 %的胰蛋白酶(含0.05 %的EDTA) 消化并吹打成单细胞悬液,置于预先用0.1%的明胶包被好的培养皿中,37 ℃,5%CO2 培养40~50 min ,吸取上清,1000 rPmin 离心,10 min ,加入一定体积的含20 %胎牛血清的DMEM重悬以去除饲养层细胞, 大约1×107 个细胞. 注入5 周龄的免疫缺陷(SCID)小鼠大腿皮下. 3-4 周后, 检测畸胎瘤的形成. 采用HE 染色方法检测畸胎瘤三胚层分化情况.
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细胞海洋 + 1 + 5 极好资料

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发表于 2014-6-26 09:32 |显示全部帖子
这个还蛮初级的,更好的检测是利用小鼠囊胚或二细胞电融合做chimera或者tetra-aggregation的检测,子代小鼠的出生率嵌合率,以及子代和ICR交配的小鼠携带标志基因的比率更好的数据说明细胞的多功能性。
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专家 优秀会员 金话筒

发表于 2014-6-26 16:11 |显示全部帖子
回复 kasaya 的帖子
* X5 r" }3 ]2 L1 c7 [1 O! C9 O9 E) z( S# v& G+ ?+ q
人家还没说是人的还是鼠的,你就这么急于回答了啊。。。。
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发表于 2014-7-7 01:58 |显示全部帖子
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回复 Jonathan 的帖子0 O( l1 Y' ]7 e% f5 W. f

; _5 t. `) w/ T) ~1 e! V是人的吗?如果是人的,除了养EB球,在nude小鼠体内打畸胎瘤之外,还有向三胚层的各种系统的progenitor或者终极分化的体细胞进行体外诱导分化,会比较麻烦。没有注意到是人是鼠,不好意思啊。
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