脐血单个核细胞分离出现很多白色沉淀的问题

lyj-0017

回复 tianangelt 的帖子, V  F( E+ W. @7 L1 e, a# I

# w/ V1 \7 Y+ c( M- e. K确定这一次做密度梯度离心的转速都与以前相同吗？另外，能否说一下你吸取白膜层的具体操作？该图看上去像是血小板过多！

feifangli

" f- T; S  S+ M3 O# K7 |6 I
+ Q) N3 |8 Y! J. j, H可能是操作中的问题。

tianangelt

回复 lyj-0017 的帖子& |+ N# M4 k; U$ W

6 T2 q' q- Y6 c- ?& k/ [6 T是的，转速都是一样的，吸取白膜层时为了避免丢失，在白膜层的上下液面都会多吸一点，和之前的操作也是一样的。如果是血小板的话，细胞培养的过程中会慢慢消失吗？

lyj-0017

回复 tianangelt 的帖子$ N: R0 {1 m/ s) `7 Z; r

' ?3 E0 |2 o; a应该就是在上面多吸的那一点点的问题，血小板在以后的培养过程中应该是可以慢慢裂解掉的，就跟单个核细胞中的单核细胞、巨噬细胞会死掉一部分一样，但是也不能忽视一个问题就是，血小板中含有一些凝血因子，不排除会使细胞聚集的可能，个人理解啊~

tianangelt

回复 lyj-0017 的帖子9 x' O% e8 @( y" k# n6 b! y

! l- V: h) k/ A5 i4 x. I: c' R! h平时分离偶尔也会有一点杂质，但那次分离超级多，后来细胞转移到另外一个瓶，培养了一段时间，没有加因子，只加了点血浆，细胞生长状态挺好的。

zsc78

先检查一下Ficoll里有没有类似的东西或者是否过期。再检查自己在实验操作过程中是否有问题或污染。

gzeb

看图似乎白色物挺多的，试试低速离心能否除去，少量杂质没什么影响的。还有这个应该跟你的操作有点关系，一般在梯度离心完吸取的时候要特别小心，就吸取中间那一层细胞，也许你为了能得到更多的细胞而多吸了其他一部分溶液，这样反而带入更多的杂质，如果离心效果好，杂质少，效果不好，就是你这种情况

tianangelt

回复 gzeb 的帖子
; q3 B! v) P! }( h4 N2 X. }0 Y' m# O, x
最近Ficoll离心完后的白膜层，和上层液面的分界很明显，但和下层没有明显的一个界面分层，偶尔有分界比较明显的。这个是操作的原因吗？每次的转速都是一样的。

gzeb

回复 tianangelt 的帖子! V6 A4 W2 ]& v1 K. K, f
0 Y9 D- d: Z/ \
你转速多少，多长时间？

tianangelt

回复 gzeb 的帖子3 @/ Q% E* J/ M3 o8 d
6 G& m' g: ~& K3 Q9 h* e2 e
2500rpm，20min