如何形成拟胚体EB

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我以前做过用人的ES细胞通过形成EB再向造血细胞分化。感觉形成EB挺简单的，当时的做法就是用dispase把ES消化下来，消化时间久一点，可以把克隆拍打下来或者用1ml移液管刮下来，收集到离心管中静置，待克隆沉降后，吸去上面的液体（包含很碎小的ES克隆和MEF），用DMEM/F12重悬，再静置吸去上层液体。最后用ES的培养基重悬，接种到低贴附培养板里。培养两天，然后换成分化培养基诱导分化。

xieyuhuan

大家好，我想问下我用拟胚体悬滴法做的造血分化，做的过程中遇到很多问题，希望各位大叔呢个能传授下经验。8 l* n% a  D) D. _7 g' e2 k; m3 t
我把人IPS消化成单个细胞后用培养基重悬25ul一滴悬滴置于10cm皿盖上，皿底放PBS，放置四天，后把形成的球吸取下来置于低吸附皿里，这过程中有时候球会散，养着养着就散掉了是怎么回事呢？还有形成的球继续往后做，14天后把EB消化成单个细胞，我用的是TRY在水浴箱消化30分钟，后取出再用10ml针头重悬吹打，可是细胞依旧还是团块，不能形成单个细胞，请问大神们这该怎么办，有什么办法能把细胞消化成单个细胞，又能尽量减少对细胞的损害呢？

细胞海洋

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细胞海洋

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