大家帮忙看下人源MSC的状态吧。谢谢

michael1013

回复 zttamy 的帖子$ Q5 ]" G% \& P! \; o8 I1 q

+ S0 F  h8 N3 d的确在传代后第2天仍然有大量浮游的细胞，并且我用台盼蓝检测过，几乎都是死细胞。并且但是传代时用的是10cm的dish。粘附的细胞密度的确比较低。
6 Y  |/ G, J' O% K+ P/ O是不是换6cm的会好一些

michael1013

回复 zttamy 的帖子8 w. q" H( s7 x3 ?# Q

* B. e% V2 w4 a& G$ o- T! d换液是隔天一换

sailree

回复 michael1013 的帖子. K+ g, X+ j3 m5 w* H& v
! _9 G. O- _/ y" W) F+ T& t1 x% s
血清的话试下DMEM+F12+10%FBS,密度8000~12000不过传到后面依然会出现细胞老化的情况

michael1013

回复 sailree 的帖子; f8 q  g' i% h3 X( P; l/ R- g9 a9 X

1 }  |+ s# R, l9 X. y. T1 V多谢多谢！
+ p; U* r6 l' Y5 i* s3 v8 E是不是说单用lonza的这个培养液就可以了，不用往培养液里添加别的什么东西吗？3 Y) k* A4 _4 j) w  J' ~3 n
还有就是接种之前用不用铺gelatin什么的。还是直接就铺就可以

kyo000

貌似接种密度太低的话细胞就容易出现老化，跟代数高低没啥关系吧。。。
- F5 O/ w6 I6 K3 @. o0 v不过一直用的是低糖的DMEM加胎牛血清，还真没用过无血清培养基，不知道养的怎么样。。。

zttamy

回复 kyo000 的帖子) X" V1 U! f! w) k
3 D" n3 e0 S5 h6 F' o8 X
跟代次还是有关系的，文献研究显示越往后传老化现象越明显

sailree

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3 j% [+ x9 v1 {+ h- g0 }/ ?  P- b5 \, B7 v1 c* v  ^- _
直接用哈

caiyu07248

你复苏细胞的密度是多少？应该是密度太低了吧，复苏后9天了，细胞还那么稀，细胞太稀了也比较容易老化，建议复苏时的细胞密度最好比传代时密度高10%！

michael1013

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! }- ?8 Y: K: x( ~9 @& v. `% G% u2 i6 k
复苏时候的细胞数是30000（10cm dish），但是有大量死细胞。估计有大概40%吧。
5 R' u* z  {; \1 w/ S; P! b0 ?还有就是，因为这是从别人那拿的stock。刚问了一下，说是2年前的stock，并且一直在-80度保存。不知道这会不会有影响。- q8 N9 w* Q+ g, }/ h/ d
谢谢

zttamy

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3 T5 _8 q1 n; l6 Y3 F( [- N1 z
) ^5 }. a2 p* H: ?9 F, i-80℃都放两年啦？活性肯定有问题，液氮里放2年都难说