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细胞复苏后死亡细胞很多的原因?

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包包
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发表于 2012-8-20 13:29 |显示全部帖子
请教各位,为什么细胞复苏以后死亡细胞特别多啊?导致复苏细胞死亡的原因有哪些呢?
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金话筒 优秀会员

发表于 2012-8-20 13:45 |显示全部帖子
这和你的冻存方法有很大的关系,并且即使方法正确,难免也会有细胞死亡的~
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金话筒 优秀会员 帅哥研究员 积极份子 小小研究员

发表于 2012-8-20 13:52 |显示全部帖子
细胞冻存的时候可能会因为处理不当细胞死亡,还有可能就是解冻的时候的事儿,比如解冻时间过长
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包包
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发表于 2012-8-20 14:24 |显示全部帖子
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也有可能与细胞的耐受能力有关,不同种类的细胞的耐受能力不一样;
; ^( @9 o- C. W! X1 H. Z; r8 y另外也与复苏后的接种方法有关,分为直接接种后过段时间再换液和离心后去除冻存液后再接种;5 r% w$ R+ b' K3 D- p6 K. }
此外,也与冻存时的细胞密度有关~
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包包
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发表于 2012-8-20 14:46 |显示全部帖子
这个影响因素很多,比如细胞种类,细胞适合的冷冻时期等都会造成
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发表于 2012-8-20 14:54 |显示全部帖子
还有,你最好简单介绍下,你的冷冻细胞和冷冻过程,这样便于大家分析问题
& v0 f+ j: P5 k/ E& N: _, q/ e6 c" C

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包包
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发表于 2012-8-21 08:17 |显示全部帖子
冻存前的细胞,应该尽量分散吹打开;冻存时冷冻处理尽量用程序性降温盒;复苏的时候,从液氮拿出细胞后立马放入37度水浴锅,待冻存细胞90%融化后立即拿出,利用余温把剩下的细胞解冻;解冻后的细胞立即进行后续操作。
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发表于 2012-8-21 09:06 |显示全部帖子
我的细胞冻存后复苏效果也不好,很多死细胞,用的是6:3:1的冻存液(按Gibco说明书上做的),因为没有程序冻存盒,每次都是4℃ 30min,-20℃30min,-80℃过夜然后转至LN2。复苏出来大概死了有一半以上,困惑中!
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发表于 2012-8-21 09:26 |显示全部帖子
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# }4 f3 N* }/ a+ n& z8 f
$ Z9 N& g+ C4 U" D% M4 b3 U' {3 h我们一般是-20℃要放置2个小时

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发表于 2012-8-21 09:29 |显示全部帖子
细胞本身的状态,冻存体系,冻存时的操作手法,复苏时的操作等等都是影响细胞复苏率的关键因素,注意把握
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