实验室想测正常人全血中CD34细胞的含量，具体方法

Demon_CN

我们做过两次实验，一次是只标记CD34
5 ~2 b  n4 X& n/ l4 l4 C具体是加20ul抗体+50ul全血，染色15min，# S' `3 Y, e* J& }! v" S# l
然后加溶血素450ul避光10min0 y0 |% i4 N% m& _; B/ T& r* t
加PBS1ml，洗两遍- z; A& K; }$ k% y8 ]4 v
做出结果居然能到20%多
8 ~$ `! w" ~' u5 d$ x1 q( k后来经BD试剂公司建议再用CD45划门! V2 g) K; f. P8 j
具体是加20ulCD34、CD45抗体加50ul全血
+ S6 I/ s/ J' `( n1 j$ M* A然后加溶血素450ul避光10min
4 d4 n5 y& C- j% L; R* ]加PBS1ml，洗两遍
7 H4 l% q  Y$ W. K结果还是偏高很多，求指导

yqbter

抗体的浓度是多少？
0 s# J! C" p1 B. ~/ Z20ul好多的！

穿越地平线

可不可以发给我一份外周血流式的PROTOCOL，万分感谢！

lyj-0017

个人感觉应该先溶血之后再与抗体孵育，直接用全血与抗体进行孵育再溶血（即使清洗三遍）可能会增加非特异性结合吧？