帮忙看看像不像肿瘤干细胞球

cocoslee

为什么你的成球了呢？没分选的话，只是肿瘤细胞，你得分选具有干细胞表型的细胞才能说是干细胞。可是我用的磁珠分选出来的细胞养着也没有能长成这样的。都是单个单个，很少有能连起来的，几乎不生长。你是怎么培养的？请详细说明下可以吗？O(∩_∩)O辛苦了。楼上的说只有无血清培养液才能养的出肿瘤干细胞球，是指的什么？是分选后的还是分选前的细胞培养出来的？请明示，谢谢。

jojomayer

回复 cocoslee 的帖子
/ |) j  `1 }. z
8 a/ i8 Q$ F: H, Z% M9 M就我目前掌握的资料来看，血清会引起干细胞的分化，干性的丧失，所以培养干细胞必须用无血清培养液，不管是分选前还是分选后，另外，请问你用磁珠分选，使用的是什么标记呢？

cocoslee

5 V7 N) w! ]: z: T5 t6 V

) m0 x4 |7 \8 n5 _回复 jojomayer 的帖子
6 w/ I1 e- W  V+ l* F  [( [6 \5 E9 ?4 e
CD34/CD38.那处在静止期的细胞生长应该是个什么样子呢？

cocoslee

回复 jojomayer 的帖子9 s) C% M! h0 a# q
, F) n' G: E& D4 l
我刚才又goole了一下，有无血清的培养方法,也有说是基质细胞共培养的体系。基质细胞培养和间充质干细胞的培养基本差不多。

jojomayer

# x2 e: [" a2 Q/ ~$ p
+ l6 M3 C4 Q- L# q" ^1 s回复 cocoslee 的帖子
- G7 i$ E8 c9 |9 k8 a9 q( G: K/ A. Q, J8 I$ {
呵呵，说实话，我也刚刚养活了第一批，今天刚到第7天，还不能确定这个问题。9 p$ Z" s2 v& d7 |- q! t8 Q2 T

) P, }; d( J0 b+ F9 ]9 [" b现在还在纠结到底要不要今天换液，怎么换，要不要离心呢。
- A8 A. [# X; @& Q! x( n" b1 f
, h( Z( g6 s; k/ @8 r) y2 X不过我觉得，因为在原发肿瘤中，肿瘤干细胞应该呈静止或者低活性的，而在手术后或者化疗后复发的肿瘤，其中的肿瘤干细胞部分应该更加活跃。
% F+ p+ p& t3 U- ?4 ?. x2 U( ?$ ]. R0 E
所以我觉得静止期或者接近静止期的肿瘤干细胞可能应该是原代肿瘤刚刚取样得到的时候那个样子吧，但是因为得到原代肿瘤的时候并没有进行分选，所以也无从知道他到底是什么样子。
5 l5 {' g1 A) ]0 `
9 u. I6 Q) Q& s' E7 p- f4 l就我看过的文献来说，目前神经球培养就是一个尚不购严格，但是仅有的(存疑，没找到更多的文献)富集肿瘤干细胞的方法，经过这个阶段后，再进行分选理论上会分出来比例更高的干细胞。
/ g4 s0 D6 R5 c0 n+ _# u4 n, m- u  ?0 L9 v% Y7 T$ R' }: K- {) H
当然，接下来的问题就是分选标志，最经典的是CD133阳性细胞，还有一大堆各种各样的标志，如ALDH等等，但是依然没有一个是确定的，而且也确实有文献说CD133阴性也可以成球和在裸鼠体内成瘤，所以，纠结了……
1 t8 f) W$ U6 x# z8 v0 q8 N
4 }" m7 ~2 b. z- M- y) G听听大家的高见吧

cocoslee

我现在也很纠结，分选来分去还能剩多少细胞呢？

小木梅

回复 cocoslee 的帖子$ E4 J; W( L- x2 T/ ^* N
+ Z* H( e1 z# e9 e3 ?
我用常规的无血清培养（文献里报道：DMEM/F12,20ngEGF,10ngFGF,B27）,3瓶有一瓶最后长出球了，但是我传代以后，细胞就贴着长，今天第9天了也没有球出现，中途有换过液。这个细胞是用别的方法养的，和文献不一样（不好意思，这个方法不便透露），就想问问，从形态上看像不像，因为现在细胞很少很少，也没有做后面的鉴定。

小木梅

回复 jojomayer 的帖子0 e2 n, |0 Y7 V9 k9 |+ Q
, D) S* l0 G) b* c
手术或化疗后，肿瘤干细胞更加活跃的可能原因是什么呢？或者激活状态的肿瘤干细胞是什么样但是生物学行为？什么激活了它们？

小木梅

回复 jojomayer 的帖子
: E9 _& s9 f/ h! {. K6 x  t* `1 ?0 G# W9 ]
我觉得离心换液后必然要吹打，对成球的肯定有影响，我建议把培养液转移到15ml的离心管中，放置20min左右，小心吸取上面2/3的培养液，损失的细胞不会很多，再加入新培养液

jojomayer

回复 小木梅 的帖子* F. A$ J- v/ D

* @0 |' `3 d% q" D  d- d1. 要问形态上像不像你得上图，让论坛里的高手看看。
+ k  X; f! I* f' m3 k* n
( |9 w6 B8 u' y' |* y, ?, b2. 这个问题不好说，我猜测的一种可能性是肿瘤干细胞和已分化的几系肿瘤细胞间有某种联系，可能是互相分泌某种细胞因子之类的，有可能已分化的肿瘤细胞能够分泌防止肿瘤干细胞被激活的因子。如果已分化的细胞减少了，肿瘤干细胞失去了抑制，就会被激活从而大量分裂。$ y2 `1 a4 V4 u

1 E. A9 F1 }# U1 @/ V7 J0 z3. 你的换液方法我基本同意。呵呵