pLP1、pLP2、pLP/VSVG包装慢病毒

刘森泉

请问有人用过pLP1、pLP2、pLP/VSVG包装慢病毒吗？目的基因和包装质粒的用量分别是多少，包装效果最佳？我用的是磷酸钙法，用293T包的。谢谢！

sizhengliu

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+ Z5 Q" ^# @. v5 Z5 o试试1：1：1

ghfvcat

英骏的慢病毒包装系统？
) T4 r, j9 }0 X9 Y2 K英骏很会做生意，这些质粒都是混在一起卖的，不拆开来卖，也不告诉你比例。一万多的试剂盒，里面质粒混装，只够转20碟细胞的。
! Z, }2 z& O7 l- \5 T楼主要是试出来最佳的比例，广告一下，气死英骏，哈哈

franklinhg

其实要破解英骏的花招 很容易的。 四个质粒都是按照1：1：1：1的比例混合的，而且最关键的是四个质粒都是氨苄抗性的，这个就好办了啊！转化一次，多挑取几个克隆，扩增后提取质粒，配置1.5%-2%的琼脂糖，然后电泳，根据分子量的大小，可以知道那哪个质粒是哪个了，这个也许要多几次，看自己的运气和手法了。 我向别人要了10微升的混合液，然后这样做了，分出来了需要的东西， 给师弟在用了。效果还可以哈

sj03572001

楼上是怎么确定pLP1、pLP2、pLP/VSVG质粒混合液中的各个质粒的比例是1:1:1的？，很多童鞋说按1：1:1的比例包出的病毒滴度很不理想

salomemao

我用的是SBI的慢病毒包装系统，感觉病毒包装效率不高，但是现在也找不出什么原因。我也用电泳把混合的3个质粒分离开来了，而且按照不同的比例与买的混合包装质粒的包装效率进行的比较，都不高。有哪位大侠能分享一下提高包装效率的经验呢？现在我有买了浓缩病毒滴度和提高感染效率的试剂，现在还没有到货，到了以后试验一下，如果效果好的话分享给大家

igdb

这个推荐比例确实是1:1:1的。ADDGENE上应该有卖的吧，国内国外好多实验室也有这套体系。我也用过这套包装过病毒，效果也不是很理想。 个人认为提高转染效率是关键吧。

ghfvcat

哈哈，实在不确定比例的话，从英骏买个现成的混合物，做一个实时定量看看质粒的比例

sj03572001

VSVG作为膜蛋白，表达量过高对细胞毒性，回造成细胞死亡，如果按1:1:1的比例应该不是最佳的，nature protocol  有篇pLP1、pLP2、pLP/VSVG系统慢病毒包装的文章，文中的比例约为4:2:1，可能就是考虑到VSVG的毒性，文献如下

hetven

这比值似乎是存在一定争议。有人建议1:1:1:1，但VSVG确实会对细胞状态影响较大。另外一个比较流行的建议是plp1 10.5, plp27, vsvg 10.5，表达载体9.5.
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在plos one在篇文章的比例是1.3表达质粒，0.9 lp1，0.3 lp2及0.5 vsvg。这个vsvg比例似乎合适，但显然不符合表达质粒:包装质粒为1:3的规则。另外，这篇文章加Cacl2转染，不知道为什么。