关于细胞消化的相关实验操作

dandan9230

1消化时间，胰酶浓度都会因细胞种类而有区别。一般贴壁较强的，需37度，放2-3min需要镜下观察哦，看见胞质回缩，少量漂起。不要全部漂起的时候，就可以了。
0 X9 A) Q3 }% a& R& T1 ?) d  D2终止可加入10%FBS的全培养基。与胰酶量1：1，或略高于胰酶的量。轻轻吹打几下，不能有气泡，要轻柔。立即离心，弃上清。9 e$ I7 @) }4 Z5 b
要多做，摸索一下就知道了。加油！

827914734

就MSc而言，个人觉得完全可以消化到细胞变圆漂浮起来，MSC消化相对容易，即使0.125%的胰酶在室温下也能很快消化下来，如果大多数细胞已经悬浮，稍微吹打几下即可，个人感觉MSc贴壁没那么牢，而且这样消化下来接种效果也可。其实消化过程和吹打都会对细胞产生影响，如果吹打技术比较好的话（比如不会产生气泡），也可以尝试多吹打几次，这些都是完全凭个人经验，自己多操作几次，在看一下接种效果，就知道自己应该怎么做了。这种事情没必要每个人都统一起来。

yangwy028

消化时候，肉眼看胰酶浑浊后再吹几下，就不用看显微镜也知道细胞都已经变圆掉下来了，赶快终止就OK了。可以试试的。但是具体的细胞种类不一样，消化的时间差别也很大的。

yangwy028

不用含FBS 的，普通的培养基终止就可以了

aulenuyah

胰蛋白酶的消化能力很强，0.25%就已经是很浓的了。消化的时候只要胰酶铺满皿底就可以，不需要摇动。具体时间与每次买的酶活性有关，没有固定的时间。一般在显微镜下观察时，发现细胞便圆，轻轻振荡之后有少量细胞漂浮就可以终止消化了。终止消化时候的血清没有十分明确的浓度，可以用培养液，大约保证培养液和血清是1:1的浓度就可以了。混合之后用力吹打，可以尽情的用力，不过要控制尽量不要出气泡或者把液体吹出培养皿，直到把细胞完全吹打下来，一般这个时候的细胞贴壁能力和生长能力都比较好。不要等到看着大量的细胞都漂浮了再终止，那样的话胰酶对细胞的损伤太大，不利于细胞增殖。

cmy008

我是作间充质干细胞的，一般是用用0.25%胰酶常温下消化3-5分钟，看到细胞间隙增宽，细胞由梭形变圆就立刻用等量培养液终止消化，但没有继续作吹打，感觉消化下来的细胞偏少，但后期生长还可以。今天看了这个帖子收获不小，学习了。

zhang0194

这个终止消化的时间是很重要的，我们平时做的时候就把握下面这几点：1 x% Y4 w$ n% O/ S9 _( r
  前提是无血清培养基培养的；
# s! `1 j4 ?6 c; p3 h1 y/ {4 x& \        1. 消化时间是很短暂的，加入消化液，摇动10次左右就放在显微镜下观察，这需要助手，在瓶底还挂有细胞（形态没有完全变圆，还三三两两的在一起），立刻送入工作台，加1倍的新鲜培养液终止消化，一般这中时候再用移液管吹打3-4次就可以吸出来了，随后再用PBS 涮一下瓶子，别浪费吗。
1 ]! o8 c5 z; S3 a) k        2. 胰酶的浓度，建议0.125%,浓度不高，这样消化不是很快，可以留下充足的观察消化状态的时间！
# r& }6 s/ _3 F$ W; \      

yxwfly

我们一般75cm2加入1ml 0.25%的胰酶。
  @. D& V! B: i6 ]9 w加入胰酶后，缓慢地来回晃动，使胰酶铺满整个培养面；# G& I+ N5 I. f" T* }$ B
置于显微镜先观察；
$ Z7 E) D# V- E待绝大部分细胞变圆后，立即将胰酶吸出，弃去；
. R& x  r5 q! f2 r$ M" E9 p+ N加入含10%血清的培养基终止消化，进行后续操作。# j0 S# |, I2 @" v

) C' q$ |: b* w9 `/ @+ f要注意的一点是：要在细胞变圆但还未悬浮在胰酶中的时候吸掉胰酶，否则就连细胞一块吸掉了。1 n0 ~9 ~, m/ x8 j$ d1 b; b
这样做的目的是减少胰酶在传代细胞培养基中的含量，降低对细胞的伤害。

dianying

回复 yangwy028 的帖子, J" \+ ~! [9 }% A6 m/ k
9 e" E, ^6 k1 ^0 S3 b
你好，: A' K8 q4 [, @# q( C
看见你打了招呼。谢！
/ e# G% H' D/ F0 v! V7 T6 z8 w) [但是看起来有点可笑，系统说我没权限回打招呼。所以就在这借块地儿招呼一下吧。但愿以后这网会大度一些吧。

gaojingyu0311

吹打的次数和时间对MSC的影响大吗？