提总RNA问题

pla269

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你用什么牌子的trizol

amosummer

靠经验的了。也可以来个摸索试验，不同体积试试，哪个效果好。

huangcong1988

回复 pla269 的帖子# L! n+ m/ A! I- b( ]

' p! f$ W5 t% h( i% k: I  ]2 G5 j. p有国内的，也有国外的，国内比较便宜，进口的较贵，但是经验告诉我们，两到三微升足矣，多了浪费，少了又起不到抑制RNA酶活性的效果，无论国内还是进口，都行，两到三毫升，具体特殊情况具体再看，我看看牌子去。。。

huangcong1988

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Scotland，UK的

endless-caas

回复 huangcong1988 的帖子0 Z  c9 U% W: H8 H

/ G7 O& y9 z* ]交流一下下，你们磨样用的是什么样的棒？是用的一次性的塑料的还是用的电动的铁棒的呢？其实对于磨样，我有时提的时候，就是看的经验，觉得差不多了就行了，但是，可能仅从眼观上看肯定是会有误差的，你们一般是以什么标准呢？磨样加液氮好还是不加好？如果加的话，一定要磨成粉吗？对于磨样过程中样品的飞贱你们怎么看待呢？

huangcong1988

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' r' l  w- q0 b$ E% U3 Z
你们磨的是植物组织还是动物组织？我们磨的是动物组织，用的是瓷棒，跟研钵一样的瓷的。
' P) `) S" V; P4 X) V2 f4 s) O
+ W! v& U" G. S$ X  Q是啊，磨样多少一般都是凭经验，大概可以就行，一般就是绿豆粒那么大就行，其实黄豆粒大也行，主要是加入trizol的量有限，磨太多样不仅浪费体力，trizol对于RNA的抑制作用也不能正常发挥，所以还是尽量不要太多，用肉眼看，一般那个小勺三分之一就够。: ?9 E: G% w9 T
磨样肯定是要在液氮中磨的，取出样的时候也要把样放在液氮中，其实比较标准的磨样，整个过程都是在液氮中进行，所以边磨要不断加氮，不要使研钵中的氮干掉，还有开始要加氮到放有研磨棒的研钵中预冷。
" D2 s, e' p! G6 M这些都是个人经验，你们可以试试
2 I+ H( N0 S# C, c, _; o1 N' _5 A样品最好是磨得细一点比较好，那样提RNA的效果也好一点，而且尽量要缩短时间，因为时间一长，RNA肯定会降解，提的效果肯定受影响。+ K0 U5 B/ {1 E( V; w
磨样过程中样品飞溅，如果说样品比较多，溅出去的就不管了，反正提RNA要不了那么多样，如果捡到研钵中会使样品污染，还有就是由于磨样需要很大力气，所以在所难免会使得氮啊，样品粉末啊，混合液啊溅得到处都是，最好在磨样之前在台面上铺几层一次性PE手套，这样使得台面比较干净，而且铺手套有一定缓冲作用，不至于使台面受损。

chliu

我们用invitrogen的，只要少于说明书上的样品的量，一般用1ml。

endless-caas

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* W; _4 \, K0 q- S0 a+ \0 ?8 J3 ]# x/ _
OK，你的经验给我提供了一定的参考价值。其实我们提的也是动物组织，大小也就像你说的豆粒般大，不过，你们用研钵磨这么小的样，我觉得很厉害。我们时常是直接在1.5的离心管里面磨，但是就是不好做到一边磨一边加液氮，一般也就加一点就磨了，磨完就放冰上。可能还是提得少，所以，我提的结果有时候就是不太好，呵呵，学习了噢！

pla269

回复 huangcong1988 的帖子+ D8 P1 Y; ?7 c+ a1 Y
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提成绿豆粒大，已经不小了，你有什么窍门吗$ A0 h4 H+ L" e5 X( d0 X6 `4 y5 ?

huangcong1988

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: D& u9 v' G, T+ B/ v0 _3 M3 O0 T( h% T. E, Q0 \' z& Q  R
貌似这个没什么窍门，就是磨样呗，多了就少取点，一般样品是足够的，而且比较多，所以磨样的时候如果样品溅出来，没事的，放弃那一点，要不了那么多，主要是样品分开时候比较难，分开之后可以选择性的放弃磨一部分