求助双酶切的问题

hndxws

20-50%的效率

xiangchou812

紧挨着也没关系，只要没有重叠就行。我看了一下，都用二者的HF,先用一个酶切，1－2h后再别入另一个酶就可以了。你想验证到底切开没有，也不用送测序，只要做一个载体自身连接，涂板看有没有菌落长出就是了，要是长出的菌落很多，说明没切开。

军医

回复 xiangchou812 的帖子9 \3 G) Y( D5 P5 ]$ S# [. u' m3 n

, ]9 W. @' }) ?谢谢，已经切开了，是分两次加的。

xiangchou812

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+ i9 g8 _0 v# _; ~% X
  |# W9 V' n' K, v不管怎样，切开就好呵呵。祝试验顺利！！

POPOLD

分着切 neb

hbs08230

EcoRⅠ的酶切效率和能力是很好的，所以应该先切speⅠ，然后做取几个ul跑胶确定彻底切开了以后，做一次抽提回收，再用EcoRⅠ切。抽提很重要。( t5 E$ m$ B3 R1 p* r' B
同时要注意整个酶切体系中水一定要占到50%，不能说是质粒的浓度不好就减少水到小于50%总体系。同时20ul的总体系的酶切效率比50ul的更好。4 s5 W3 U) w0 U4 f* L7 Z& `/ }. S
如果不喜欢反复折腾的话建议换酶切点。。。

军医

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) c* P: i' V; N' B' L$ t$ N4 I+ h4 k, u; S5 u/ l
谢谢