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& @# s& u7 s Z* r. E
目录: 9 ?5 I; c( L5 {) O3 `/ q) ]
一、体外培养的概念; H1 U# x1 k8 F: h* h
二、体外培养技术的发展历史
) v6 n- g: g8 {" _7 H9 {9 v* {(一)体外培养技术的创立6 i# l" N- W/ S
(二)体外培养技术的发展7 j# f0 m* i i1 g# N
(三)我国体外培养工作的发展情况3 j: z: e T& K' W
三、体外培养技术的主要类别1 d) }7 W5 n# f/ ?) \
四、体外培养技术的应用) G7 G2 R- h! M k
(一)在组织学与胚胎学以及细胞生物学领域的应用$ ^- n2 X- e$ V R7 Y2 u+ u! R
(二)在肿瘤学方面的应用. i) G- p* f# N0 r
(三)在微生物学领域的应用
- j* c; w, c* K7 A3 ~0 Z(四)在免疫学方面的应用
/ {4 R7 v/ \; F0 b(五)在药理学领域的应用# k" l6 U- e% i M
(六)动物细胞与微生物大规模培养技术在生产实践上的应用
/ q* e K* ]& y( @(七)在现代医学领域的应用: I+ A% T) w1 n. o9 i6 l0 r0 T
(八)植物组织细胞培养技术的应用
* Z. G9 s, D. B4 |1 w五、对体外培养技术的评价
9 Z9 `6 X, u% g' Q! g7 X' q第一部分体外培养的基本原理与技术* @6 S) ~5 c. @
第一章从体内生存环境到体外生长条件2 m+ b" V1 u; ^: ]/ [0 O, M* t
第一节体内细胞生存的营养条件4 J" @8 a1 Q: ?4 {
一、水8 x. @2 i7 @0 X6 ], C% b7 f: O
二、无机盐类$ u R' Y7 P. W8 T! v- Q% ]
三、葡萄糖
: A! D) s4 ^2 {( y- H$ w四、维生素
8 \; d# O P. h五、氨基酸. c3 z6 o* T+ v" [
第二节体内细胞生存的其它条件
8 K2 ]6 m3 I) v9 _; r# H一、温度6 C! D9 e1 ?5 q# W7 J$ `
二、氧和酸碱度! d: z4 P( Z6 w; p
三、体液渗透压
5 J$ G) `2 i$ h% R8 ^四、细胞之间的相互联系
$ p t/ z& w) {6 q0 u# ^/ W3 S第三节体外生长大环境
, K! g2 x) D# o& |6 n, [3 e一、体外培养实验室+ c" F |+ f6 s# x
二、体外培养的设备和器具
9 m5 C, u# }: ^- n" D(一)大型设备和仪器5 Y" s; X. _% D3 o
(二)培养器具/ J$ @* P0 f* M$ ?4 c
第四节培养用液
; J Y6 H8 _# O一、水与平衡盐溶液! A Z& |# ~/ A) Z9 N4 K
(一)水与缓冲液
_- P$ |; o' T# e% J5 c$ A" L(二)生理盐水与平衡盐溶液& H5 |3 M2 ~+ e! V, f
二、培养液
( [) V, [8 B1 u1 A9 p; e(一)天然培养基
5 R1 {! K4 ?5 \(二)合成培养基# z" p9 C% t9 L9 z9 b
(三)无血清培养基
4 g8 y( V5 \% f1 H C三、体外培养的其它常用液
, E) _5 U* D/ X" L(一)其它常用液的类型
- u7 k4 i8 D( H(二)其它常用液的配制! L5 m5 A2 d2 F, K
第五节细胞在体外生长的其它条件
$ d' {+ a, }* `一、无污染的气、液相环境$ H9 `0 V, ?! t) ?
二、温度
3 }+ D& ^% b8 X6 }# J3 R$ m! Q三、生长基质% b* K2 A1 [0 A( y4 l5 B9 l
第六节清洗和消毒% @. W3 u5 V( d6 {' h/ ?9 v& \
一、培养用具的清洗
& A( F6 ]: d/ _7 z2 m(一)玻璃器皿的清洗
" r* U2 H. Z& D; O4 n6 t(二)胶塞和塑料用品的清洗
~) m4 C( m( Q( R: i! I(三)清洗后物品的包装
# z! W! r/ i, L$ m- ]二、培养用品的消毒和灭菌8 A: e0 ?) G5 u0 a
(一)物理方法* z) W3 D: u/ Z! G" l$ G
(二)化学方法消毒9 P- h5 l7 Z' L; k. l4 K: n
第二章体外培养的基本方法和过程
5 C, j2 O7 J6 o% m& ^6 N [; q* a7 Y9 }( E第一节原代培养# y2 q1 q. Q9 v B& ~
一、原代培养的过程
0 ]' D; Y& [1 J C(一)取材及培养材料的制备" b8 w8 r9 `7 n# B A
(二)分离(散)细胞的方法5 ]: d. I3 e( M
(三)接种与培养过程
?0 D6 T8 }7 k/ P7 [(四)更换培养液
0 G/ K- u- }2 B4 D2 W- {9 w二、原代细胞培养方法的注意事项8 t0 |3 X; W, s+ S
第二节继代培养( q) s! Q' u# O# R5 ~0 T& x( y8 T
一、原代培养物需要传代的指标; U. v& e; r$ N- w3 Q
二、传代的过程
, q: b2 v& D+ P1 q3 [三、传代培养的注意事项& F0 \' p' j3 d% p; _9 J# i
第三节体外培养的基本方法和技术) h: e" m! o. T+ b {7 y
一、悬滴培养法
/ o2 k8 G+ o# W2 x8 L6 z(一)Maximow双盖片悬滴培养法
* o: m2 c/ F9 z+ U Y* C(二)改良的植块悬滴培养法5 z. x0 U. _0 \7 F H' ~
二、培养瓶培养法
y9 Q6 F/ |; h- ~1 }三、盖玻片培养法
; y7 V& ^3 a8 D2 n四、旋转管培养法
* N' W* A, t4 t$ O5 v五、灌注小室培养法
8 P) A, ]8 C" [8 M N* j0 K6 i8 W六、培养板培养法
5 K3 {$ q0 e5 y( L七、二倍体细胞培养法
- y0 T& b' G' y6 _( l/ T: Q3 W2 y八、克隆培养法2 [& Z( ` e+ x3 }
九、中空纤维细胞培养技术
( f7 m: M3 m( `( t. x5 d十、微载体细胞培养法: e% G, h6 R6 q3 S4 ~6 Z, r! r
十一、微囊培养技术, R/ P: t6 v2 |2 c2 E1 @
第四节培养物的冻存与复苏 M* t3 V$ r/ p. a
一、培养物的冷冻保存与复苏原理
+ h5 s! Y8 s+ f7 @. p, F f3 ?(一)冷冻速率
3 y7 b) ^) J9 }(二)冷冻保存温度" N) Q+ c" ?; b& ]
(三)复温速率; e( x f% O+ l/ }( A2 A4 m
(四)冷冻保护剂
: ^( k* Z% |/ D二、冷冻保存方法1 [, P% A4 W8 }. v# [1 l, T7 y* w) N
(一)非玻璃化冻存方法% f# p) J0 V$ T
(二)玻璃化冻存方法
* e: E0 C2 P7 y6 F& x0 c三、冻存细胞的复苏% z+ b, A* t! p" |+ ~+ z. q
(一)非玻璃化冻存细胞的复苏方法
' H# }. r1 U3 q/ A* N8 ?) C(二)玻璃化冻存细胞的复苏方法# b4 E; B' b4 }* s) }: L- i* w
第五节培养物的污染
/ H. u( i- z% V: v3 p/ T一、微生物污染的判断
& s3 [% z: t8 ]; G(一)细菌的污染及其判断: r9 A/ T; r4 Q* E
(二)真菌的污染及其判断
) Y) ~- ^' U, H$ H. a(三)支原体的污染及其判断3 d: f8 n' [2 `: y$ t" f" u
(四)病毒的污染及其判断
! m3 e' {' n+ B9 N$ |! n6 U5 E二、污染的预防2 s& w7 v' d% F4 x2 o2 P
三、污染的排除
. L: |) i. Z& |) ~! o2 s$ S第三章体外培养物的生长生物学
) E5 w- h/ b! }. D( D- E$ n第一节体外细胞培养物的生长类型( Q1 s; ^3 C5 Y; I7 U7 F( ^
一、黏附型细胞
( ^/ E! x' ]& n( P k5 F(一)上皮型细胞. c9 Q, [2 M7 L; m/ l
(二)成纤维细胞型细胞
& A' N \ b9 L0 ](三)游走型细胞
; Z% t$ x. L: O+ u, [3 ~(四)多形型细胞* w1 D) G9 s& j* E0 t
二、悬浮型细胞. E* j J5 o n- q& b) h' H% o
第二节体外培养物的细胞生物学特点$ O. {; }# n* S! S1 j
一、培养细胞分化状态的变化
. D% J& I$ l0 u二、培养细胞的增殖能力$ y% X( N/ ?9 U) m# [
三、体外培养细胞的生长过程3 k) w4 `9 c& i+ l0 x& [
(一)原代培养期+ o+ r, O! S0 B4 ^) S ]( @4 r: D, a3 ^
(二)传代培养期$ T7 W8 H$ L" A W! K! W9 \7 L1 I
(三)衰退期( O2 r4 d2 ~6 j) [# O
四、体外培养细胞的形态学
! U) c' i* c% O- H五、植块培养物的生长生物学6 E5 m4 J! a: _* \1 W* v) `8 ~1 S. _
第三节影响动物细胞体外生长的因素
( P3 N- M" h3 A. e$ Z. p7 S一、营养成分与生长基质成分对细胞生长的影响
+ u& v; U- c$ P' O(一)血清的成分与作用
6 V- S8 x, J0 e(二)无血清培养液的设计及应用
( g5 ^' l: w% [(三)生长基质成分; b3 A" q( G) d, \
二、温度条件对细胞生长的影响
. ?) `% ?) s2 B1 ?+ {& z; k三、气相环境对细胞生长的影响/ }3 r" P6 a2 a T; b2 Z M& o8 d4 H
四、培养液的酸碱度对细胞生长的影响2 K& a" J M# Y' Q+ s
五、辐射线对细胞生长的影响! b! S S% ^) }6 o: G
六、超声波对细胞生长的影响) A$ b) `/ P+ g( ]) \. _, H( g
七、影响细胞生长的其它因素& Y4 w) U4 f3 [, T' d
第四章细胞分离与纯化
* ~( {" R2 ` H$ o7 n3 \第一节解离(散)组织制备细胞悬液过程中的细胞分离
2 ]9 T% f# w' A& p第二节利用细胞体积和密度进行分离纯化的方法3 O( Y' n5 u W8 o$ ] N
一、一步密度梯度离心法
, e! y& C7 N, c% F8 `(一)血细胞的分离
; a% H" l+ i7 e& q( b(二)玫瑰花环细胞的分离
; D) F" {0 z+ V3 k O二、等密度梯度离心法
* e+ [1 R5 K( b# @* A+ O(一)连续BSA密度梯度离心法
% U* M9 |7 L7 w8 o; g! R(二)非连续BSA密度梯度离心法3 l- ]# d; x% \" Q) ] ^0 y+ [
(三)连续Percoll密度梯度离心法( z$ a4 T+ o8 O. d" B
(四)非连续Percoll密度梯度离心法
. N& C! R: x% m! K三、速度沉降法/ {. M- u9 G$ T1 z
(一)低速离心速度沉降法% j: f ~) l3 a5 G4 U
(二)简单策略沉降法
( ?/ u! N2 }( ^( ?; s(三)简单重力沉降法分离白细胞与红细胞
0 n, D1 x5 M# c& b! ~# I* C4 \(四)简单重力沉降法分离粒细胞
4 j5 t4 U% I1 n' e+ Y- ?四、离心淘析分离技术
1 w+ `! }( \# N/ [第三节根据细胞表面电荷的细胞分离方法1 E$ s, ^! N3 @9 T) ~
一、自由流动电泳分离技术
. O, L6 `: \/ I5 F9 h# z+ S二、密度梯度电泳分离技术) G1 Z1 {$ G# r6 Q0 n( }" C- d# o
第四节基于不同黏附特性的细胞分离方法
2 O6 t8 r2 W! Y+ s. N一、差速黏附处理
/ A' D" j4 r" U) ]5 T5 F二、葡聚糖凝胶G10过柱法
/ C: _7 d" K. q" V! R2 ^' H) Y三、羰基铁粉法( S# F6 D* x6 _ c2 r- t: Y! \
四、尼龙毛分离法: ]! g( j6 i0 i4 r6 t/ C
第五节利用细胞表面标志分离纯化细胞的方法
( d% e' \2 x7 V0 }. @( g! O一、免疫溶解法
, K$ p: B0 M/ w: \4 E5 K二、盘化法; [2 x7 z7 X. [0 F
(一)直接法
w9 I; O$ k; r( `(二)间接法
) I3 _+ b- Y" T; Y三、凝集素凝集法/ x$ m0 K5 A F3 }# ~/ D
(一)花生凝集素凝集法分离皮、髓质胸腺细胞+ A% J+ Z+ T+ @8 v: W6 \
(二)大豆凝集素凝集法分离T、B淋巴细胞
! r K; G. y5 h; \四、玫瑰花环分离法8 _0 D2 H. ~0 @# r0 |, \
(一)E玫瑰花环分离法( L; B; j6 b6 R4 Q: n* E' l
(二)EA玫瑰花环分离法
" E. r p4 P% h+ {' i% i% s(三)EAC玫瑰花环分离法$ `3 q. T. | E
五、流式细胞分选术
; U& Y# s; r9 X1 y) _/ S7 z(一)流式细胞仪的结构和工作原理
4 B3 [; A6 [/ ?. T0 \, p+ X(二)流式细胞术分选细胞+ l6 Z+ g/ `) [
六、免疫磁珠分离技术
) y* S8 X1 _( o5 h9 w第六节利用其它细胞学特性分离纯化细胞的方法
% U n/ K" {7 x% ~0 F一、反复植块法
9 P; x) B; }5 \9 ?: c二、有丝分裂抑制剂处理
9 }- }# Q* y" e, @) B$ M第五章细胞系(株)、细胞克隆与细胞周期同步化* ~, r4 X* j3 ]2 V
第一节细胞系(株)的建立与鉴定: E: q1 k2 _. m- O0 o
一、基本概念
5 n0 G1 S% U. o8 j6 W- ]二、建立细胞系(株)的档案/ _) Y% `% d) p5 L7 S; A
三、细胞系的鉴定3 l$ q }: b! E$ y, S/ u: ~
(一)细胞系鉴定的内容5 U0 ?# `; W# `- j% s* w$ S5 T1 r
(二)细胞系形态学的鉴定方法5 [% i: \2 q* j; Y5 B# J2 I( `2 c
(三)细胞系的染色体数目、核型及其带谱分析( V( m6 Y, c8 Y0 ]0 [0 v3 \
(四)细胞系的同工酶酶谱检测
. C, a$ r4 w! b( S四、细胞系(株)的保藏
, _' j2 X* n$ L; w五、国内部分已建立的细胞系或株名录
3 g& a# M Q9 q. ?六、国内部分已建立的单克隆抗体杂交瘤系或株名录$ Q% ?+ h+ t; |
七、国外部分已建立的细胞系或株名录- Z0 G0 m0 b' ~
第二节细胞克隆
1 A& f8 o4 V' k$ S) ~一、克隆培养技术
9 M( {9 G C% i4 A$ f$ M/ m(一)稀释铺板法
. L8 F& D: P) j* }7 Y(二)饲养层克隆法1 Y- L; Y4 E/ L- o3 f1 y! y. W
(三)胶原膜板或血纤维蛋白膜层板克隆法
/ k% h2 L2 @; F: U& ?(四)琼脂克隆法
7 L4 E4 R' B& E2 Z7 e& Y V' w. N(五)在琼脂基底上用甲基纤维素克隆化
3 u% u% }( n2 `8 Q二、影响克隆形成率的因素
# s5 g% D8 e: M/ }" M三、克隆的分离0 R3 A" P) f) A; o' k4 c9 Z5 A
第三节细胞周期与细胞同步化
* X4 f8 M e* l( v3 x4 f7 i5 G一、细胞周期5 `+ G) n0 u, U/ T8 n: U
二、细胞同步化
5 R( Z' b Z5 r! J7 r(一)各期细胞的分离
+ l8 Z# [, a V+ H(二)细胞分裂相同步化法4 d9 c& Z- h4 R3 C# a
第六章器官培养2 B, I- p8 F) p0 ^
第一节器官培养技术概论5 |2 y$ ~7 ?+ f9 }; T
一、器官培养技术的基本要点
: Y7 K& z5 l* p. P- |, M二、器官培养技术的发展简史
. E- C& q+ H5 u) s0 c8 U三、器官培养的基本原则
' d! \; w) k: A! _# E: o a) s(一)养分的供应与取材) N5 R! Q& U# ^# c6 J" g( j
(二)抑制细胞迁移
" ] G G, ]; M5 Y5 W四、对器官培养技术的评价
+ D- ]; D! }8 v- |五、培养器官的生存环境及影响因素
# w4 H K( A1 o( c(一)培养器官的生存条件及其影响" f3 {9 L1 M4 k$ i
(二)培养器官的内在因素及其影响
+ s. T1 |% ]+ ]( N9 i: `" m第二节器官培养的基本方法
; u0 Y8 f' {' f# T- L; T一、表玻璃器官培养法" j2 {% ~0 t0 ?, E, J9 b7 S
二、琼脂凝胶培养法(Wolff器官培养法)
5 x$ J. C0 U- g6 A0 N# Y8 l2 e三、悬浮培养法+ k; o0 N) M! {
四、直接漂浮培养法1 C9 x& M( ?0 @( I
五、擦镜纸培养法6 u, K6 ?" Q& T9 G! z
六、金属格栅器官培养法
7 L! J" w1 F# U J! s$ R七、琼脂小岛器官培养法2 S. i( N: _2 G( N0 `* A
八、陈氏滤纸虹吸器官培养法
- h) _3 |* m% R2 T, ]4 z九、灌注式器官培养法7 [% d( `% y) H& q N' _
十、旋转管培养法
: O1 f% A& R; b- I十一、摇摆式器官培养法
Z* P- Z3 t; E0 s3 N3 J+ E" H* n十二、器官灌注系统
& {& G& c+ `2 b5 \十三、鸡胚尿囊绒膜培养法
5 z @# W. x3 X2 T) Z4 C十四、早期鸡胚胚盘培养法
3 @; ]$ e4 S0 Y" ]' q第三节器官培养各论
! l; x& I) p3 s% W: W* i1 _2 x2 R+ l一、胚胎肢芽的器官培养
& l7 e* S, g4 l3 ] }" S(一)胚胎肢芽的血浆凝块器官培养方法
8 @3 Z3 T, F B U" q: v(二)胚胎肢芽的琼脂凝胶培养法
; s" @" m1 l' z5 X0 ]二、胚胎性腺的器官培养
5 q2 Z5 x* [: p三、软骨与骨的器官培养
/ n E0 L$ u& \* w% T* q(一)软骨的器官培养4 A& @% Q- Y( i! I D
(二)骨的器官培养
7 k* q. K* ]4 E/ F$ ^$ Z6 _四、神经组织的器官培养
0 T. C: M1 b* h) P五、牙胚的器官培养
+ k0 h' z) _% r7 r$ W6 P, V(一)Trowell培养法培养牙胚器官
9 f& X6 y+ ]- I8 t4 {7 N(二)悬浮培养法培养牙胚器官* w" G3 d& E! u4 Z
六、腭板的器官培养
. p5 D" a- {! G- f4 `% S(一)腭板器官的静式培养法0 l5 O5 v; h% Y. C7 Y7 a! J
(二)腭板器官的转动培养法
, g L& Z6 U( ?; i七、毛囊的器官培养
, B$ \' s+ h2 X! M' f4 k+ C八、血管的器官培养
! t4 K1 _% i: O) H3 y+ b(一)血管的悬浮孵育法器官培养
6 S2 ?" J; _- J B& L(二)血管的琼脂孔器官培养法
7 G7 p% {( |9 S* a+ m; [3 }九、肝脏的器官培养 I7 y( }4 w0 K: T# h
十、小梁网的器官培养: j! b0 A/ Q9 c% P: a1 ~: W+ N i
十一、人胃肠黏膜的器官培养
7 q9 }% q1 ^% g3 u' O% \十二、胚胎器官的上皮与间充质植块的联合培养6 R1 r6 _' y) O+ q- g3 m
十三、肿瘤侵袭研究中的器官培养
8 q; I& g' V/ }3 A% k(一)肿瘤细胞与靶器官植块的制备: C$ {& g3 t6 d2 S. S
(二)肿瘤细胞与器官植块几种联合培养模型
0 e' O/ u1 ^- @" i第四节全胚胎培养% Y/ @3 c; w" G: t) s! C; n8 p
一、植入前胚胎培养
( @# F. D) p1 D+ u6 o) N) S二、植入后胚胎培养# K: m2 X1 N& \0 p6 G& U$ I- H
第五节器官培养的应用2 C$ l8 E, ]$ K9 p+ `: L2 A
一、器官培养中的形态发生研究& R% i# S7 S" F( h# T
二、器官培养与发育分化研究3 I+ r7 Y5 h0 r8 z
(一)外分泌腺的发育分化; ?" a F8 c- E: V7 q$ e. D/ w( b! j
(二)内分泌腺的发育分化4 s; F9 e3 J0 ^7 `
(三)性腺及前列腺的发育分化
' p t, m6 ?, C, b(四)神经组织的发育分化' R1 E, O8 R6 w
(五)各组织细胞间的相互作用对器官分化的影响
2 R2 W6 Z4 \: r6 O2 J7 I三、体外培养整个胚胎的生长发育
1 h, q4 f9 `. N1 d( A' n四、胚胎致畸作用研究- J# Y( z+ R, m1 K E
五、器官的功能及其代谢研究
# D3 V1 o( a) j1 f六、器官移植中的应用
" L) ~! V. L5 h; s7 h! X) R! R(一)器官保存
+ Z2 Y2 ~ c7 `: y* e! K(二)降低免疫原性) q( p& B) g9 N3 c
七、器官培养与肿瘤侵袭研究
8 I7 k: N' d* B2 H! r% x% x第七章培养物的观察检测方法
2 g' [9 ]4 I5 a& o7 \* v g第一节活细胞的观察检测方法
- ~9 c% Q" [7 @: f8 h9 r一、相差显微镜观察培养物的形态结构' y; A6 I" Q0 U) x: q, c) O
(一)相差显微镜
" e* D, V- f4 p. m( w(二)用相差显微镜观察活细胞的方法
% i' K% F8 e1 T' w" @(三)活细胞的动态观察与缩时电影, u. G, F- A( E/ e8 d2 o
二、细胞计数法
3 `% o9 P+ G2 ~! p$ v三、细胞生长曲线
1 _4 u" o$ v; }$ X+ H' k1 I四、体外活体染色观察与活体染料, Q/ S# b3 _) U p) ?
五、活细胞的染料排除检测法
2 c4 L2 n( B* F六、细胞增殖活性测定的3HTdR掺入法$ i: D n. {# C, Y
七、细胞活力测定的MTT比色法
* o$ X! s- n) R1 [ k% x第二节普通染色观察
& N9 [$ D% u1 L+ `& w- h4 O一、HE染色法* Z+ f2 i# _% y$ e5 a# D
二、吉姆萨染色法
+ h9 H8 M) B. h三、载坡片处理方法7 o3 A$ e0 r$ N
第三节细胞化学技术
; z# H! c" i$ H+ a: ^) a' \$ x. @一、酸性磷酸酶
9 J3 `6 p9 N% ^$ S& V2 d' T二、葡萄糖6磷酸酶
, O5 \* h% r2 \$ Q三、琥珀酸脱氢酶7 x: n, l+ r5 x5 ^: I: z# p
四、DNA与RNA的吖啶橙荧光染色法
7 f5 ^+ Z# P: |9 V- r0 Y五、DNA的富尔根(Feulgen)染色法
: b" |8 ?) `, ^( r% `& W, D- }第四节免疫细胞化学技术, |7 C7 i( O7 M S: Y' _& P
一、常用免疫细胞化学技术原理+ p8 u9 `+ @% {, z$ z
二、常用的显色标记物0 z/ w" [- F0 d7 _* q
(一)辣根过氧化物酶- a" F. C6 `# B% h9 C
(二)碱性磷酸酶' ^* i' x% D- I' v3 N& Q
(三)荧光素
( r6 t. v+ P& n( ?/ x3 P5 P2 ^(四)胶体金与免疫金银技术
- d; R. r+ H# C I三、免疫细胞化学方法及标记物的选择& @/ o: {4 J0 d* K" i; q
四、免疫细胞化学的一般问题3 Q( j: N" w" e$ v7 J
五、免疫细胞化学染色的典型程序+ W# E8 l. i9 c: _
(一)免疫酶间接法" A3 q) q* R& S: J2 G4 ]
(二)免疫荧光LSAB法
. t! m0 d& j `4 ~$ Q0 B(三)PAP法
' N9 q( U& W2 P. h+ M(四)SPA胶体金银法
$ ]; \/ t6 R7 J$ [第五节原位杂交技术
: ]8 P( j9 S2 o% f一、探针与标记物的选择
$ l. v& B4 d/ f! D5 I! S二、原位杂交技术主要实验材料
+ x6 h2 e8 @7 A6 L" B三、杂交 }7 x; J# N9 ]/ e
四、显示标记物" O( C. D- k; S& C8 W
五、设立对照, w1 u% Q) q; q6 p* S9 j
第六节电子显微镜技术
K! {7 H6 u3 \; e1 Z" U2 O0 E一、超薄切片技术# h6 V# K0 Z# J) C
(一)对培养物的预处理
9 N# _; V$ D/ e6 \(二)标本制备
3 Y5 I- {7 }) a; n8 G: f# l" e二、电镜免疫细胞化学技术' y/ p9 X1 M, {: G6 {1 x6 n( k J
(一)显示细胞表面抗原
9 @9 G# x% X/ e6 O. O7 g(二)显示细胞内抗原: B$ g" u5 t" s- e9 F
三、其它电镜技术简介: G/ S" r0 Y* x0 R0 F1 f
(一)扫描电镜技术
# U6 W% G' e0 r. o0 p(二)冷冻蚀刻复型技术% f" W7 H8 }2 ^5 a `
第二部分动物基本组织的体外培养. X" V: B0 ?3 B
第八章上皮组织的体外培养1 l0 P/ o. U" ~# v' l
第一节上皮组织体外培养技术概论
5 J" d1 o" D) y+ W! @6 _7 G一、在体生长与体外培养的上皮组织的基本特点' z, v: d @7 a! K1 z+ \
(一)上皮组织的形态结构0 x3 ?' s7 f: P9 E) @$ P: U( j
(二)上皮细胞的极性+ V0 G. T& u# D7 i+ U! v$ M
(三)上皮细胞间的连接) N: N8 t# b( c1 n0 v
二、体外培养的上皮组织细胞的生长生物学5 M( i2 F5 h2 M% h
(一)体外培养上皮细胞的形态结构
8 E2 C, B3 N6 F# j, A(二)体外培养上皮组织的生长与增殖特征
1 \& P9 _/ I, m! ?" Q3 |三、体外培养上皮组织细胞的观察与检测
, U. y* m, o z! ] x" c(一)一般形态学观察3 X! \! D) `& \: p
(二)组织化学与免疫组织化学观察与检测# x$ d% I! P( N9 G
第二节呼吸系统有关的上皮细胞培养1 S% u6 Q7 H* ~) M
一、呼吸道导气部上皮细胞的体外培养
( r& Z& n: n0 d& w( V! P二、呼吸道导气部上皮分泌细胞的悬浮培养
7 v [( m/ _3 R三、Ⅱ型肺泡细胞的培养
1 L+ y3 ?9 g0 w$ d) v四、鼻咽上皮细胞的体外培养
1 C; N+ T" d# R% `第三节消化系统有关的上皮细胞培养* U1 `+ s$ D$ q4 Z5 R6 M; e1 m
一、食管黏膜上皮细胞的培养
, _; G1 ^, M+ n6 ` W u4 ~二、胃黏膜上皮细胞的培养
6 M1 v6 y; i0 i" z* j- J7 ]' j三、肠黏膜上皮细胞的培养4 y, w. E# {4 X# k: ~' w
四、胆囊和肝外胆管上皮细胞的培养
3 l+ C$ `7 j' j. }第四节腺上皮细胞的体外培养
5 j8 z+ M; @( {2 Y' V% D* N一、唾液腺上皮细胞的培养6 v$ ~9 ^' H) q8 J
二、乳腺上皮细胞的培养
/ b6 E2 X; M( d) @' x3 `+ n0 d(一)乳腺上皮细胞原代培养的建立和维持
3 a! P; t1 d- b" R(二)乳腺上皮细胞的悬浮培养: t4 Z6 H% k9 p2 y2 I% {5 {, N- z# d
(三)乳腺上皮细胞在EHS基质上的培养
3 c9 v- H5 J2 M) q# _# S(四)乳腺上皮细胞的其它培养方法
+ t% U& C% Y4 A( H(五)乳腺上皮细胞培养中的有关问题
6 ^, ]/ w! N' k' U+ l第五节表皮细胞的体外培养8 v+ L4 U% H3 X
一、表皮角质形成细胞的饲养层细胞培养法
u5 b6 T7 H: r/ B: K: N- j二、角质形成细胞的复合培养法
3 ]/ ^: q5 z9 j! f2 W(一)在人去表皮真皮上培养角质形成细胞
7 g- ~+ P6 c, l# S(二)在真皮替代物上培养角质形成细胞
( P" t8 K9 A( h n: R9 b三、表皮黑(色)素细胞的培养% r$ p& f# F+ M' F3 b. o
四、表皮郎格汉斯细胞的培养
: k1 I) Y$ W- D. o% m: X第六节血管内皮细胞的体外培养 E }$ s" Q8 j# W# m8 U- X
一、猪主动脉内皮细胞的培养$ \" U0 }& C+ }- Z2 s! b* {, H
二、免主动脉内皮细胞的体外培养, |. Z5 W* r5 E H% e+ @
三、人脐静脉内皮细胞的培养
# B- T1 f' H7 q q- L4 p" T四、大鼠主动脉内皮细胞的培养; D- r% v. h. q9 I1 _% N1 p: H
五、滤膜培养法培养血管内皮细胞
% s* T2 \& D: L6 _六、免脑微血管内皮细胞培养/ O9 N5 r" n: I( n
七、大鼠肺微血管内皮细胞的培养; C( N/ ]( ^ L
第七节胸腺上皮细胞的体外培养8 E3 B, w+ ?0 X2 K1 v. c
第九章结缔组织的体外培养
" i! g! d8 t! z9 u! E第一节结缔组织细胞的生长生物学特点与基本分离技术; Q' e" l, H* \
一、结缔组织细胞的生长生物学特点2 t- E- l' p! X9 ?
二、体外培养结缔组织细胞的基本分离技术
, R' l" g" F! ?% N7 ~5 Z) g5 e第二节结缔组织细胞培养各论* D5 f$ z& ?( T
一、成纤维细胞的体外培养3 @+ v5 [5 M4 Z
(一)真皮成纤维细胞的体外培养
I* E% w: Z1 ~. h& Y+ u7 x(二)人包皮成纤维细胞的无血清培养$ K( @& }& j: \& @ k& X- Q; U& A
(三)中国仓鼠胚胎成纤维细胞的体外培养
2 W2 q) P' e; m$ F7 w(四)鸡胚成纤维细胞的体外培养5 m1 l! s5 l( o1 ?5 m( I0 h* T
(五)人胚肺成纤维细胞的体外培养
) @3 ^4 o5 p# |! c% m8 e+ @% o3 i& I(六)小鼠肾间质成纤维细胞的体外培养
7 |/ q# m+ |4 q, n4 X; s# b- ~(七)眼组织成纤维细胞的体外培养
3 ^% w% p0 f0 ?0 i0 \二、巨噬细胞的体外培养. l4 {, N3 @2 L. o! v' ~) b
(一)获取肺泡巨噬细胞的方法 ~! q' K3 |( F( O
(二)获取腹腔巨噬细胞的方法% `) s4 b2 H/ b% T9 U. d
(三)巨噬细胞的纯化
, U% @* T. ~* s' I% C$ c(四)巨噬细胞的接种和培养% \5 \) r/ M, ^
三、脂肪细胞的体外培养, I/ D2 ^) B/ W9 E% {" x' |
(一)大鼠前脂肪细胞的原代培养
- ~) M$ Z0 j2 ]6 N3 L; T(二)小鼠前脂肪细胞的原代培养. W$ D. [$ x# v! W9 q: d
四、肥大细胞的体外培养
2 ~2 L+ g1 U7 ~ j5 J, _8 Z(一)肺肥大细胞的体外培养
# l) l% D. P1 S% V8 a) H7 _(二)肠肥大细胞的体外培养
: Z6 w! B8 F3 o2 p5 r7 j+ [; r(三)皮肤肥大细胞的分离和短期培养
' I$ p) L1 H4 [1 Y五、间充质干细胞的体外培养
: D% d: K6 `! I3 N. {9 B, p(一)鸡胚肢芽间充质干细胞的体外培养; e' F& a! x5 g* t% ]
(二)大鼠骨髓间充质干细胞的体外培养( Z) l5 N# L3 r v: D2 v
(三)人骨髓间充质干细胞的体外培养
' F2 w9 z: }* \4 ?(四)兔骨髓间充质前体细胞的体外成软骨培养
) V( }& N, [/ l+ d) F第十章几种重要脏器细胞与特殊动物细胞的体外培养
) [$ d* r( s( p3 x$ _0 A5 u- |) n! v第一节眼组织细胞的体外培养# M. U2 b$ M+ r$ R: d- H
一、角膜上皮细胞和内皮细胞的体外培养
+ [# u* n% U- s1 E; H0 X5 J(一)角膜上皮细胞的培养
" j/ A/ O6 d. Q. J. F; Q$ a! w' ](二)角膜内皮细胞的培养. @1 [7 w) B7 w$ ]) h& X* n! T
二、小梁细胞的体外培养8 N( c/ Z- K; Q" ]
三、视网膜色素上皮细胞的体外培养: A J0 J3 v2 I! m6 ]7 y5 c. f$ F8 J
四、晶状体上皮细胞的体外培养
4 x4 ?/ c( ~7 u+ k2 H五、视网膜米勒细胞的体外培养
9 E8 _( b& A$ L* J) `( r+ T) J第二节骨与软骨组织的体外培养+ G# h( _7 k9 P
一、成骨细胞的培养
$ H! [% L2 c- u' E5 ^+ g(一)骨内成骨细胞的培养) X, z. k4 b, `) [! A/ K5 s
(二)骨膜内成骨细胞培养
8 C- }5 f5 u7 T8 B6 I二、破骨细胞的培养
5 @6 G: E0 j2 D9 q& _0 R(一)成熟破骨细胞分离细胞培养法' O5 z! k* _: f1 j3 b. f$ U# s
(二)骨髓长时间培养诱导分仑形成破骨细胞法
9 A& N x$ n5 `; r$ S1 r三、滑膜细胞的培养
! B: n) k+ L8 R; S% j" P(一)滑膜植块培养法
9 V0 b$ S O; _+ d0 X(二)分离的滑膜细胞培养法
0 ?) u: L1 @8 `% E p四、软骨细胞的培养7 W4 G7 t$ g; Y0 _% K
(一)关节软骨细胞的短期培养
4 W, X* [+ ?' r% j) |- O4 h, D0 y(二)人关节软骨细胞的长期培养法
- u! E. }) J6 h9 K% G第三节泌尿生殖系统有关的几种细胞培养! \$ `) N7 r( i& k; V
一、生精细胞的体外培养6 |1 K- z' w, F2 D" O( L
二、睾丸支持细胞的培养/ j9 K4 B4 ^* \: @% N/ r0 E A
三、睾丸间质细胞的培养/ V- n n$ A1 t+ V. \6 R6 G' \: [
四、肾小管上皮细胞的培养
. c4 Y: M! w1 ?1 g5 g! q) N4 X五、肾小球系膜细胞的培养
+ W! h4 }+ {# ^9 z/ w, i+ D5 {+ t" K第四节几种内分泌细胞的体外培养
: _: n" G) }& {7 @; l. r+ W+ y# q一、胰岛细胞的体外培养
7 a, F( t. ~# ^二、人垂体腺瘤细胞培养+ ]# J' W/ G/ [
三、甲状腺细胞的体外培养
; ?0 S+ {& M8 }/ n C2 }第五节羊水细胞的体外培养
, k+ I+ N3 o# E一、羊水细胞的体外培养基本方法* ~) z" m o0 Z" w0 L+ O: A# A
二、羊水细胞的富集培养法8 l% `3 B8 l5 }% k( X& t M
第六节胚胎干细胞的体外培养4 l1 O' i9 L1 J. k) B* e+ w
一、体外培养胚胎干细胞的技术原理
8 j! H3 R" x3 x9 @二、体外培养胚胎干细胞的基本过程' p7 E& _' J: \: w$ L: B' f
(一)饲养层细胞的培养
& Z4 L6 U3 D' v8 }! m7 {(二)饲养单层的制备
5 r2 x6 C5 e7 d- Z(三)用于培养胚胎干细胞的条件培养基的制备
8 c) o! n9 S7 \! R0 d' m(四)胚胎干细胞的分离与培养# q3 T4 a r: \0 j" B- d: ]
(五)胚胎干细胞的冻存与复苏
* L5 f9 G8 S6 w* {- k: ?1 O* y1 H三、胚胎干细胞的鉴定
$ D& L4 O6 @- E! |: h% [, N; b N9 N(一)碱性磷酸酶检测+ y! p( w$ l, k
(二)核型的鉴定2 j% a( Q) `+ O
(三)体外分化能力观察
3 D6 U& A1 W J# W(四)体内分化能力的观察+ [: K0 ]' \4 V' @. g8 N" ~
(五)嵌合能力的测定
% A6 Q: G% V6 h' k5 B第十一章造血干细胞的检测与造血祖细胞的体外培养* p3 z8 g8 D; {: V* J. w
第一节概论
, F8 I. e x7 B7 o一、造血干细胞的生物学特征" \& g2 i( F9 a% s5 t
(一)造血干细胞的基本特性
8 B2 X% {" e x4 d(二)对造血干细胞的识别( ]5 x3 I7 u% H3 q. T1 b4 j! ?
(三)造血干细胞的胞龄结构
7 Q0 U3 m& G' F3 @* P: m2 Q" x8 ~" f(四)造血干细胞的动力学
2 v3 `) @; f5 k% ]二、造血祖细胞
+ \' E$ G8 d" E6 i J" q第二节造血干细胞的测定技术
+ G3 L4 ~, f, h! u一、CFUS的检测技术. k+ B5 M0 f, z- s. r3 N" W
二、以标记染色体测定脾结节的形成7 i: _" n1 D4 s; `% x
三、脾结节移植法测定脾结节CFUS
; G; x# k8 [* C1 c' {! j% w! @第三节体外培养造血祖细胞的特殊实验材料
7 ^- T" ]+ Z" A& f! D2 b5 Q) X* U一、培养用液0 Z: N6 t& S( C& W+ [
二、特异性刺激因子的制备
0 o) W& w7 r1 m* @ \(一)横纹肌条件培养液的制备# J [7 h" j7 K: W5 Y
(二)白细胞条件培养液
, f- R5 T- p5 D+ z(三)脾细胞条件培养液
9 x+ u1 ]2 a5 ]$ F+ q% f( \' }(四)再障病人血清的制备
4 `+ `3 Q3 t) B& F2 v7 Z6 ?(五)胎肝细胞裂解液的制备
' u( d+ N7 J) m7 ~! z: w第四节造血祖细胞的体外富集与培养7 @! _7 m. }. s8 j$ x: a
一、造血祖细胞的富集. h" n( }) q* N
(一)单个核细胞的分离
4 |' d" H) i8 U( N(二)CD34+细胞及其分离方法
v% L5 `& }* h" p1 H0 c. r) m c: I; |. K(三)CD34+细胞的MACS免疫磁性分离方法
o: G8 f, b4 {. N二、造血祖细胞的体外培养
! h4 \; T3 }! T三、各类造血祖细胞的培养技术
9 J/ T1 _/ c7 Q7 M, M; s(一)CFUGM的培养1 S, n& ? z8 H% P9 X4 }
(二)红系造血祖细胞的培养! |/ a9 I5 v, F( u$ M
(三)巨核造血祖细胞的培养
$ u* J9 c& Y2 ~- o4 o, H u; |8 p(四)混合细胞集落的培养
5 ?+ `" P5 L1 l: ] a(五)白血病细胞的培养
! m$ C7 E' v# R(六)无血细胞体内扩散匣培养技术
* V" |$ G5 e) J0 Y! a- k( H6 ^第五节造血祖细胞培养技术的实际应用
1 d1 U; `& B& ]0 @一、正常人骨髓内各种造血祖细胞的含量测定
" I6 q8 \) j& g) d二、某些血液疾病的细胞病理学; } |& z" p; ]
三、药物对造血细胞的作用研究
$ n% X0 C N( l4 m) _四、再生障碍性贫血的发病机制和预后以及造血干细胞移植治疗9 E$ d) t2 H3 J- |9 y. R* k
五、体外测定造血祖细胞辐射敏感性与全身放射敏感性反应的关系
. j! U! ^! U- y/ Q+ |第十二章血淋巴细胞的体外培养
& i: H) _, M' j7 b( F$ g) E第一节各类淋巴细胞的主要特征
! @3 P3 \0 F7 t一、T淋巴细胞
$ d9 p* G! J5 C8 p(一)T细胞的表面标志; t' j( c) j$ @( S: A* h" b
(二)T细胞亚群及其功能/ ~$ m7 X$ n6 F9 [8 }
二、B淋巴细胞- k, N: }$ J* x. ]8 c" _+ g! G
(一)B细胞的表面标志
' U. G% i) p) U9 x6 v! U3 @(二)B细胞的亚群
( T4 k" `' B$ V9 @+ z三、大颗粒淋巴细胞
3 X. u: M& Z" `" F) _(一)NK细胞) y5 |; A& v9 j: S% W
(二)K细胞
1 [7 W$ f* d& V3 T, j+ y1 D1 R第二节血淋巴细胞的分离8 L* F6 k5 Y8 d9 G
一、单个核细胞的分离; t) _; K2 \# r8 _ O# ~
二、纯淋巴细胞的制备6 r- {# \( `2 `- J9 q2 a0 O' h+ p
(一)玻璃黏附法
4 B0 o2 n3 ]: k( J! K) ^(二)羰基铁粉法7 {# p% k* l- H! \
三、T细胞和B细胞的分离0 \ B2 l3 m5 f, `7 R; H
(一)T细胞花环沉降法4 J9 W: b4 @7 C% S2 A b, R- @. l
(二)尼龙毛柱分离法
* w0 O$ ~+ x7 J r& c四、大颗粒淋巴细胞的分离
6 X) g$ B _1 B+ S! ?2 |2 k五、荧光激活细胞分离仪分离淋巴细胞及其亚群
1 S9 Q# V0 a* O! e六、免疫磁珠法分离各种淋巴细胞及其亚群
* Q& F% K! _/ u4 z第三节血淋巴细胞的体外培养方法和应用! j6 G- b; y: s
一、淋巴细胞转化试验9 k% G3 n) [6 o z( Q3 @
二、B细胞产生免疫球蛋白的检查
9 |9 l3 d2 J3 p3 b. U8 R三、T细胞介导的细胞毒试验% j6 N& ~* |* t& o" B
四、NK细胞毒性试验; v% v0 d8 x. u" A) U$ w! ^( c
五、K细胞毒性试验
$ U# ~8 E0 C5 n6 ?" d六、LAK细胞的制备
2 _. W5 Q$ u! e* d七、淋巴细胞的体外长期培养
9 o" b, B) f/ @# }4 O, `(一)用IL2建立T淋巴细胞克隆
0 j; { h) H( G: I(二)用EB病毒转化B淋巴细胞/ u( V$ G1 G' o9 `7 f6 @3 j
(三)用B细胞生长因子建立B淋巴细胞株
) T- H, n1 q+ \# q# X# V第十三章肌肉组织的体外培养( p; m" ~2 a# n! F1 m( k5 l, x- s
第一节肌肉组织体外培养技术概论
# r% G/ t& K' e1 |% `) U# T一、肌肉组织体外培养技术的发展简史2 p# `2 w( n3 g; O- `
二、肌肉组织细胞培养的意义与评价
* z2 c" `! v, z* Y$ C第二节心肌细胞的体外培养
4 D1 l* P q2 D! M1 j- j* S& l一、心肌细胞培养的基本原理
+ u: w4 E4 C9 f) Q# S+ o( \% A二、心肌细胞培养用液( f" B3 a* D. @7 v6 M1 A
(一)常用平衡盐溶液
6 n+ w; }1 a7 _4 L(二)心肌细胞培养液
8 b/ b* E% q% ]5 H* k2 \ t(三)其它培养用液
/ k! q6 Y! f. K三、心肌细胞的培养方法/ K, B5 E& N* t7 b9 b2 ~1 ]3 o
(一)心肌细胞的原代培养
# k0 R) U5 y4 [5 h9 W(二)成年动物的搏动心肌细胞的制备
" W B5 W) X J0 i) f(三)心肌细胞培养方法的某些发展
8 P1 m* H, |+ E( ?+ x四、心肌细胞培养的基本结果与观测方法
4 d0 A% M4 U/ \$ v6 y. M(一)一般观察6 \$ r. l- H) X' n6 u
(二)培养心肌细胞的形态学观察
' y' f$ e+ O4 C$ s(三)心肌细胞搏动的观察/ c+ ^5 Q0 U6 j4 O4 ]; z7 J6 X
五、培养心肌细胞的某些电生理特性
E( Z5 T) U8 x( \) M六、培养心肌细胞代谢的某些特点4 T* J2 z+ a% {8 e1 {# V
第三节平滑肌细胞的体外培养
. r' n/ O& [. A5 c) G% k9 E一、平滑肌细胞体外培养方法
( Z7 g# i' N3 {3 ]5 w& y二、培养平滑肌细胞的结果与鉴定
% ~$ b. H$ I1 @2 e T( L三、影响血管平滑肌细胞增殖的因素
0 u8 f# ?7 H4 P第四节骨骼肌细胞的体外培养- Q* J: W, G9 Q1 G3 R
一、骨骼肌细胞培养所需主要材料
/ O3 t- P$ d3 c二、骨骼肌细胞培养方法% j0 u6 U% ^$ q/ y; x/ u3 e
(一)乌类骨骼肌细胞的培养- Z( m; F) i1 k& H
(二)啮齿类动物骨骼肌细胞原代培养方法( G; x% {4 E0 R- S* v
(三)从啮齿类动物肌肉中获取高纯度肌源性细胞的新方法
* P( ~3 i* s7 P. Z7 a9 X" b6 `! Z三、肌源性细胞系的建立6 u7 { S% b8 e' B$ @- V8 O
第十四章神经组织的体外培养# I- J% ~# T% b7 w- N
第一节神经元的体外培养
: h n# h& C4 c; v7 d9 P( z一、神经组织的植块培养法
/ I: G( V- G' {1 S(一)概述
% X, L! |* W1 Z- G7 s3 C2 }(二)灰质组织或神经节的体外培养 ?( a3 `% p6 w
(三)白质植块的培养
0 W. |7 a% S N二、神经元的分离细胞培养方法
2 V- B# o+ R/ @' c(一)材料的来源
) v% Z' ~- X) \" L. \+ R( ~(二)神经元体外培养液
+ k( E0 X. x& l. a6 ^- y" o5 b(三)神经元体外培养的生长基质4 m; ?" K5 t' e6 g1 `/ Q/ H& o: m
(四)神经元的分离细胞培养过程
1 E( R* F* ^5 |/ @1 _(五)神经元细胞的体外培养4 o# a! w* h/ r$ g9 H
第二节神经胶质细胞的体外培养9 M; }" l3 d |( Q
一、星形胶质细胞的体外培养5 X A. U/ M* l) m o
(一)取材的动物年龄与部位3 {1 k; R& V5 b: \" i7 p5 s
(二)星形胶质细胞的体外培养方法
+ Y. K0 S8 |+ Y v) n(三)星形胶质细胞的无血清限定性培养液
1 O+ ]2 K! q( }9 `% N6 I; i(四)星形胶质细胞的形态学特征与化学标志物6 n1 y) i2 [/ e# h7 m, \0 y8 I
二、少突胶质细胞的体外培养
0 Z- k$ b6 Y# r, u6 E( \' I(一)体外纯化过程
* @& C& ^" l4 P) `(二)体外培养少突胶质细胞的化学限定性培养基
( D3 U2 g3 n' N f3 V4 L1 o(三)少突胶质细胞的化学标志物
: G1 f* H& A# m h(四)少突胶质细胞的形态学特征
g8 E- P! d3 P& C) G9 q* W) w5 }三、施旺细胞的体外培养/ }( [, F7 {+ H# D; m/ Y
(一)施旺细胞的体外培养方法8 `3 |, e* H9 W4 C7 d8 h
(二)施旺细胞的无血清限定性培养基
- {( ~. T7 K3 P' R7 w8 l(三)施旺细胞体外生长的形态学特征与化学标志物* E1 q2 J9 F1 V( W" T, f* z
四、小胶质细胞的体外培养
" V) z# h' t* x" Z(一)小胶质细胞的体外培养方法5 O" U7 l' f( v- o1 S7 X
(二)小胶质细胞的形态学特征与鉴定0 C! G* j7 C6 u3 o% m. ?( e- `
五、其它神经胶质细胞的体外培养
4 f0 H! l8 x& t+ m/ L1 l+ C六、体外培养神经组织分离细胞的形态学特征比较) C9 l" t6 E# z2 O* y: d
第三节各类神经组织细胞的培养方法/ u- i) u" H" q* V
一、鸡胚背根节的体外培养
2 a1 g# V, w- s9 O二、大鼠颈上神经节的体外培养* ^, Y$ ^- k1 j. d
三、大鼠小脑皮质神经元的体外培养# X% P/ ~/ q9 q: h/ ~
四、大鼠星形胶质细胞的体外培养
# f! }. X$ g, k0 l* I, ](一)方法一：植块培养法
6 b$ e# E; i+ m' m) x* l. ^(二)方法一：分离细胞培养法2 Z, {% I! i$ F; x1 W& D
五、大鼠少突胶质细胞的体外培养' r$ b* D$ L$ C3 [7 h) S- f2 ^: i& @
(一)方法一：植块培养法
. I* \0 R }+ M1 b! F) X: W(二)方法二：密度梯度离心法
+ N; T: a; O$ h- k4 \(三)方法三：恒温摇床处理法$ k `5 O/ [- Q6 j
六、大鼠施旺细胞的体外培养- s4 R* Z. ^- \6 i0 O
(一)方法一：常规分离细胞培养法9 g& w) v& C2 `1 q5 Q4 w* B
(二)方法二：免疫选择法( o5 P4 R% d0 c/ J3 ^
(三)方法三：反复植块法
* N% ]& M6 ^' G七、鼠脑小胶质细胞的体外培养
/ K5 Z# _& G* L; p( z八、脊髓神经元的体外培养
/ O; S# }& l1 G( N(一)方法一：差速黏附处理富集脊髓神经元培养法4 q. y7 H4 X2 j! l
(二)方法二：台面选淘富集脊髓前角运动神经元培养法
* d6 s; c" x8 A九、鼠脑神经干细胞的体外培养
- ~$ p9 u$ g9 V, F7 W5 E(一)胚胎神经干细胞的体外培养
& a0 d6 U4 h+ G(二)成年脑组织内神经干细胞的体外培养
7 r/ R- X, M2 h$ T+ y十、大鼠胚胎几种常用脑区组织体外培养的取材2 x# `& g$ p% ^: A1 E
第三部分特殊类动物细胞的体外培养
3 f" Q! L3 T2 O: X, k第十五章肿瘤细胞的体外培养3 v! }9 z( E" i/ D; {* f
第一节肿瘤细胞在体内和体外的生长特性概论
. o# |: L7 s9 c2 e$ v5 {0 P一、肿瘤细胞在体内生长的特征- W7 Z/ ~; _6 I) d5 I
二、肿瘤细胞在体外的生长生物学特性: b: f$ P6 Q7 k1 E
三、肿瘤细胞在体内和体外的生长特征差别
8 D- I6 F) U8 F) B) H( |$ P# r四、体外培养肿瘤细胞常用的培养基
, z+ o2 e3 F' |第二节体外培养肿瘤组织细胞的方法和技术
: _) A; v" E$ ?8 S$ c0 z一、肿瘤组织细胞的原代培养
, v6 s( N8 p+ ^* w! w3 N二、肿瘤细胞的传代. Q/ `/ O/ `/ B9 c) I
三、肿瘤细胞的克隆培养法0 W% f( l- n. C4 t$ Y G' I' c
第三节肿瘤细胞体外生长的细胞生物学特征
`/ y; [2 y+ E C; e一、肿瘤细胞体外生长的形态学与细胞学特征
0 y* s0 x5 y: g8 v# @/ E ~& p0 ]/ `二、肿瘤细胞的核型和异常生长特性# v. N, _; ]; T2 d8 A
(一)染色体数目及核型
" ~ J e/ K V% D' R: M(二)永生性
8 \0 C6 s$ ^$ E( A% f: ]0 u1 B(三)异质性
8 x: h+ t6 J$ T! [8 B(四)动物接种成瘤性/ ]7 i* g9 \" d: j$ {0 L# d# Z
(五)非锚着生长依赖性) s6 f. A' I& {, y( L5 o4 l
第四节已建立的肿瘤细胞系介绍
% e7 O, _$ ]: X( H) i X一、国内已建立的人类肿瘤细胞系介绍
+ P& I* a( r$ _, @7 L二、国际上已建立的人类肿瘤细胞系
: @7 R6 @, {* e% ~+ A, u& B3 Y- A第五节部分肿瘤细胞的体外培养与建系过程
( |4 f( _! K3 @2 ?9 @6 Q一、人鼻咽癌细胞系(CNE2)的建立3 X0 q! U7 F) v N4 Q& c. {' ^+ B( I
二、人骨肉瘤细胞系(HOS8603)的建立
. m- S' N6 X: e8 s0 W, _8 Y- C三、大鼠肝卵圆细胞的本外培养
6 q- Q; L) d( a& r6 |! q四、人神经母细胞瘤细胞系的建立# T# s, e5 @6 ^6 E0 M; w6 L
五、人肺腺癌细胞系的建立
" D" J3 u! n* [* X5 q六、有肺巨细胞癌细胞系的建立: N i8 A* w4 Q" u8 i8 \8 D
七、人肾颗粒细胞癌细胞系的建立
0 |! \/ g+ Y9 E& e' F八、人卵巢癌细胞系的建立
# K5 a$ Z! t* j九、人肝癌细胞系的建立
* @" I" ~3 c( ^, n十、人喉腺泡型横纹肌肉瘤细胞系的建立% W$ d2 _2 d! M* Y
十一、人恶性胸膜间皮瘤细胞系的建立
* t2 z3 C1 L" B# G" P+ S* v十二、人乳腺癌细胞系(HATTORI)的建立
" a( \" B, D' U3 z V! U第六节肿瘤细胞培养的应用/ z5 f: L' Q7 E; d. k0 O* v
一、肿瘤细胞对组织浸润的体外研究
0 h6 q# j: L) [8 ?, N6 g- }* t二、人恶性肿瘤细胞的动物移植瘤研究3 } i3 j7 v/ s3 o! j( H
三、培养肿瘤细胞的体外分化实验3 J, Z/ x2 M% p5 L6 ]
四、培养肿瘤细胞的凋亡诱导研究
5 U) I1 P( x2 w; Z7 c7 I q; j; Y: M第十六章病原微生物的培养
. I% A$ g$ f0 X. S9 n& ^第一节病原微生物培养技术概论1 M" `2 z! R9 a; W9 _ L6 R
一、病原微生物培养的基本原理8 _3 o5 _* \6 A! v5 \- O
二、病原微生物培养的基本方法和技术
/ a% |) m! g, R% U1 X0 @1 W三、病原微生物培养的应用
# _/ q+ S# C& v, D第二节细菌的培养; `7 m2 g+ k/ H v
一、细菌培养的基本条件
. o# n% M* y; Y(一)细菌培养基
. `: S4 z. W* i' E4 }# [(二)细菌生长的其它条件
# y- Z O6 I) E) ~# Q5 B二、细菌生长繁殖的特点
9 e4 a+ O! M- P7 H# [: N$ h+ n9 U+ t三、细菌培养的基本技术5 x* _2 l, r) G
(一)无菌操作技术
9 g& X$ x. ~5 A(二)细菌接种技术
! ]8 _* a) w7 I. t4 Y i四、细菌培养的方法
# ?0 z; ?3 h0 _ m+ @0 g% v2 V(一)一般培养法9 b" @, z1 y/ E) [2 C
(二)二氧化碳培养法9 W7 B/ O6 O: T1 \4 Q0 s, Y ?
(三)厌氧培养法7 p4 o" O+ |6 y' M6 }* T
五、各别类细菌的培养
& r* N) O& r1 ?* K(一)致病性葡萄球菌的培养
( a+ P9 F) c# }) t" Q5 f# }(二)幽门螺旋杆菌的培养
0 v4 W1 _/ V! {. b2 U. J! N(三)结核杆菌的培养
0 Y, F, h7 D) X: c( Q(四)淋球菌(淋病奈瑟氏菌)的培养
4 t( w/ T* g3 I& Z- P, o4 c第三节其它类菌的培养 }: q1 P" @* Z) z1 u
一、放线菌的培养/ }( j/ d8 g+ z" |; `2 U4 U
(一)放线菌培养的一般条件, F. h/ m9 `8 o" f: G1 f
(二)放线菌培养基
, L. Q0 N$ r# W5 k9 M. u二、真菌的培养
# y5 o8 O2 R3 {. l(一)真菌培养的一般条件# x5 P/ Q4 D7 _& C. C7 l$ j$ M: `
(二)常见致病真菌的培养基" A/ S/ _$ O* I$ t6 y
三、支原体培养8 H& q. i: d, j
(一)支原体培养的一般条件! [$ |) o$ s- w5 E$ M4 F
(二)常见病原支原体的培养基
1 E% t8 o4 V4 z9 t- Y: L四、立克次体的培养
- g! A# X2 M5 ?, E: \(一)立克次体培养的一般条件
. x: d7 `' u y3 G" F4 P' ?4 @(二)常见病原立克次体的培养1 V3 C8 w, k; J7 k
五、衣原体培养( T1 v( {7 c$ \4 Z
(一)衣原体培养的一般条件" }, g+ A6 q8 r6 L5 w7 [8 N* s* D
(二)常见的病原性衣原体的培养
, I+ f4 A s; P* p, [( L: a7 G1 X六、螺旋体的培养0 b3 A" o4 N* P6 l7 s
(一)螺旋体培养的一般条件$ P* A8 S5 F2 A" `( v9 D1 y* E
(二)钩端螺旋体培养基
3 P- O$ a; j8 B$ \. D! x(三)常见病原螺旋体的培养
4 q6 \3 T0 D7 q8 }/ f第四节病毒的培养
/ o1 M4 j6 j1 n8 V; D一、宿主细胞培养法
" l( T2 L5 L# _6 r二、鸡胚培养法7 O) O& O' }# G# }' ]9 y# [( ]7 L
三、各别类宿主细胞培养法* B. P! ^- U1 \& \; S4 ^
(一)EB病毒的培养
3 f6 i8 ?9 U# B; A' D j0 { w(二)脊髓灰质炎病毒的培养 p3 m. Z' `) X7 X7 K. q% c
(三)乙型肝炎病毒DNA转染细胞系的建立和应用
% S5 a1 q( g1 U& |* |* J1 a4 _4 a第十七章医学寄生虫的体外培养
) R( z S( k2 ~* I第一节寄生虫的体外培养技术概论
) w/ q7 M2 R4 ~& j( V% ~- W一、寄生虫的营养与代谢特点) C2 B0 C+ b' R: h
二、寄生虫的体外培养技术类别; q8 r+ \: V7 b! `3 r) k
(一)寄生虫虫体培养
6 V3 g, F' ]% s9 F0 O" u(二)寄生虫细胞培养& `; P6 q. m; ^( c
(三)寄生虫的体外培养常用培养基
* |' H& I: k) y E' P三、寄生虫体外培养技术的应用1 F, I, b% d: ~% \2 [; b' m$ [4 t
(一)在生物学研究中的应用
+ v8 d1 z( _3 N% V(二)在病理与免疫学研究中的应用! D1 l& t! c, \3 ] W4 J
(三)在药物学研究中的应用1 s- W- h' f$ a) e$ \/ N4 w- e# `5 E1 g
第二节疟原虫体外培养
( ~9 v* \' J6 h( F; b, p& w4 B一、疟原虫红外期体外培养
5 I& g3 n( R; ^, \$ p(一)约氏疟原虫红外期的体外培养
* b, L9 O- |/ T(二)人疟原虫红细胞外期体外培养
: n& d, Y% r4 _7 R二、疟原虫红内期体外培养% {$ r3 @* h' h7 W
(一)体外长期连续培养( M+ h9 ^& R/ t! \$ ?
(二)同步培养法7 Q. O0 s1 s, q8 Y! e: S
(三)疟原虫冷冻保存技术
0 ?/ J" f! }0 R' ^三、恶性疟原虫配子体的体外培养5 L7 q3 ?+ n5 |2 E3 S: w$ {$ w
第三节机会性致病原虫的体外培养
( {/ y$ C- T9 M一、弓形虫的体外培养
. m8 C% B( j4 H4 \0 g(一)速殖子的培养方法之一：单层贴壁细胞接种培养法
4 n# x+ B+ G8 i0 e8 ~(二)速殖子的培养方法之二：悬浮细胞的接种培养法6 ~: L5 a+ Y$ H# j, y3 O9 V/ D
(三)速殖子的培养方法之三：在鸡胚中种植的培养法0 K, p) {9 o% {" h- m( j
(四)包囊的培养9 F8 c5 ]6 t# X% c5 O* m# ~1 Z# s
(五)弓形虫的冷冻保存技术- b3 K1 y, P, G4 Q) v' H
二、卡氏肺孢子虫体外培养) G, r: I3 C3 v M
(一)用非洲绿猴肾细胞系培养卡氏肺孢子虫
^2 ]$ a$ ?3 L2 T8 l(二)用胎儿肺成纤维细胞系培养卡氏肺孢子虫
0 {& D* B* S2 q; Y) i5 \三、隐孢子虫体外培养
, M' R$ j" q0 @2 L5 n K) z2 J+ P(一)在组织细胞内培养
6 g9 z/ h# K* w% a0 w(二)在鸡胚中培养
Z% a: U$ g% m, J0 I第四节日本血吸虫体外培养" U2 `8 L9 E [! _) g/ `
一、培养基及培养条件2 T( n2 [& E0 a$ Y. A
(一)培养基的种类5 X1 R' ~+ f$ H+ ~; k) i: p
(二)培养条件
5 }, D# W* i9 n( E" ~ H4 M E1 O二、各期培养方法5 I# M o. K" M) g6 _! ]# ?1 a0 ~
(一)尾蚴人工转变童虫体外培养! l/ r" H4 @4 u" q# z+ Y% x! ]: {
(二)肺期童虫体外培养
) M, D( N7 v! c! W) x" g3 @1 E0 p; {(三)成虫体外培养
6 q- E2 ~3 a8 s(四)虫卵的体外培养( O$ Z2 p! g. J" _6 Z+ ^
(五)毛蚴至母胞蚴的体外培养
" N7 C2 a8 |& n" n) {(六)子胞蚴和尾蚴的体外培养9 v& J+ W& q( s/ d: g
(七)血吸虫成虫和童虫细胞的培养1 z; n4 F% C8 O+ t! c
第五节棘球绦虫体外培养
4 I/ h& y7 N. d( J一、细粒棘球绦虫的体外培养; b$ o+ v% W* e! b
(一)囊型发育
' f. j5 U: f' H9 F% K(二)链体发育
1 n- \" g# i- z. s! w* p(三)成虫体外培养3 e' V' _; _! a4 s) s% V
(四)细胞培养
# Q/ X' P7 ]/ S W1 f8 _/ t二、多房棘球绦虫体外培养
: n. o6 p h6 S1 Q. b8 J( ^(一)多房棘球绦虫虫体培养
; _0 F& b$ `" R. Y& B( v9 S(二)多房棘球绦虫细胞培养
# g0 ?& D1 s+ ]- Y第十八章无脊椎动物组织的体外培养
, S9 c( g6 S1 [$ k j. J4 \& g第一节无脊椎动物细胞培养的基本方法和技术
@/ K- h# L; t% j一、体外培养无脊椎动物细胞的基本条件
; h# O% ^! q/ S(一)无脊椎动物细胞培养基
a) G8 [6 N! B) I' a(二)无脊椎动物细胞常用培养基的配方2 e1 ?9 i% k6 F& q' ]
(三)昆虫组织培养基的配制) d0 H( W: Q A8 T
(四)体外培养无脊椎动物细胞的其它条件. b N7 ~/ ]- ^0 w( D5 `
二、无脊椎动物细胞的原代培养
4 ^- |! B6 g1 ?2 t. ^三、无脊椎动物细胞的传代培养
6 z, r. G6 {, W2 b四、无脊椎动物细胞的悬浮培养
$ H4 {* b; z8 e3 s$ D五、培养细胞的低温保存和冷冻保存
" \" j! F3 `$ J- F6 b7 [第二节无脊椎动物的器官培养
7 E5 h$ u: u. z& y% b一、软体动物器官的体外培养
- A5 @- O- v; A" A2 ?( b2 \! T二、蠊翅目昆虫的体外器官培养
5 c6 c6 [1 i: ~3 t* U; E2 V j第三节无脊椎动物细胞系(株)的建立4 y4 m3 O6 ~. L! X" N
一、昆虫细胞系的建立
* ]# z+ B/ I" V' P5 v(一)鳞翅目2 [5 U3 q0 K: W) `# b4 Z: ?( I8 C) c8 t4 S
(二)双翅目
; J; _$ Y$ Y* B/ p(三)蠊翅目2 }' _) f ~4 c; ?) y
二、昆虫缺陷型细胞株的建立9 U. [' x* N4 [! `$ Y' X& @( l
三、软体动物细胞系的建立
: c/ j, g! ^3 p(一)蜗牛细胞系的建立
- u9 O x" } X( W8 g(二)牡蛎细胞的离体培养
6 p1 f# O& a+ W" R6 ~) f, Q四、蜱螨(扁虱)细胞系的建立( t# t( L0 y1 j
五、建立细胞系的注意事项" E1 `; _9 m3 W8 [0 }+ c0 s
第四节无脊椎动物细胞的大规模培养
+ v- e5 ?' ~. M7 b8 Q一、大规模悬浮细胞培养的添加剂
. v0 u1 B3 x$ ~* [& ~/ ?6 e7 O/ Z二、低剪切力连续生物反应器+ U9 k' ~4 q9 T8 S
三、有血清培养基扩大规模培养昆虫细胞技术
# |7 k2 p# I* s/ V3 j9 S4 A* q( s(一)扩大规模培养的主要材料* p3 j' [4 s; d3 E" J) R K0 s' }1 V
(二)扩大规模培养方法9 }" t/ D2 A* n$ b' J( N5 i( H$ i
四、无血清培养基扩大规模培养昆虫细胞技术
m2 V1 v5 ^( y: V# m! v第四部分体外培养技术的应用
( l% |' R5 U. c( @第十九章体外培养的应用技术
" W* d5 l1 E4 }- D: U7 M7 @% k2 O第一节细胞分化与体外诱导分化
) A9 h0 P' t. `2 N2 K# O& u/ }一、正常细胞分化
* c7 o! d& d' A V3 E- S( j二、EC、ES和EG细胞系0 e. V% e. J* b0 J
三、ES和EG细胞培养和建系的基本技术+ Y, ]$ k* c- J7 _
(一)饲养层细胞
6 n( _. e3 S! l) L(二)胚胎细胞来源6 \' O+ k: D0 r+ ]9 f
(三)ES和EG细胞的培养过程
' N2 W1 d/ |; N(四)ES和EG细胞系特性和鉴定
L1 x: ?5 u6 e0 y/ d四、ES细胞体外诱导分化
- u3 ~/ x3 r1 ]% L7 t, l(一)ES细胞体外诱导分化的意义) x+ S Q' O# \: e& e; i
(二)ES细胞体外诱导分化的基本原理6 [; [3 x' l* m. F( L" Z
(三)ES细胞体外诱导分化的基本方法: i, J. r8 b+ D4 O- f
(四)ES细胞体外分化的细胞类型
: u8 i9 l. B* N五、诱导分化细胞的永生化
1 e2 s0 L: R9 g9 q% I第二节细胞融合技术3 A) D. e# I- i8 c$ W H7 H; J
一、病毒融合法! o0 {$ P. ^" c5 `' F
二、聚乙二醇诱导细胞融合法
7 F1 _$ H" v1 f1 a; ]三、电诱导细胞融合法
2 W) r1 r. p/ e, y& r c3 A1 M第三节体外受精技术
/ ?) t0 z& a% Q7 H8 }一、体外受精的基本实验条件
5 j; z: c, Z4 ?" M/ i9 C8 Z(一)体外受精所需的主要仪器设备和消耗用品
. U n( @/ [5 v0 K2 p(二)体外受精与胚胎培养环境的设备和管理
$ ~' i( S5 h. Q& v- v5 D(三)胚胎培养液$ @- v5 R! g2 P6 I8 g q
二、胚胎的体外培养- E9 M5 q6 |+ r
(一)卵母细胞的收集
- n/ B. p7 Y- p0 j' O9 {2 m1 w(二)精子的体外获能4 E; G- u3 k3 S; b- ]
(三)体外受精
t8 `, _ i/ m0 S(四)卵裂观察及胚胎评分: E1 }; v: v* ]3 Q0 I; y
三、胚胎移植1 ?; o0 v& T. x, D7 ^' ^
第四节基因转染技术与体外细胞转化0 O- C; V" F1 u9 P) A5 s
一、基因转染技术
' v/ s8 ~% a2 l: P(一)待转染细胞的准备
4 x" i! ~8 R3 n, f1 w- w) y# K(二)质粒DNA的纯化9 A/ d, Q- E) W( X) C+ m* B
(三)基因转染的方法+ q) u" E. C# D+ Z2 l
(四)转染细胞的筛选
# F+ F. z* {, w2 C, F二、体外细胞转化
0 f1 d% j2 h1 ^, q# h9 E' c(一)细胞转化的概念与细胞转化的过程: _7 @$ @# E' z+ }4 s# \# {
(三)诱变因素诱发培养细胞转化的程序
* D# W" ]8 D, R6 L! P) x三、转基因动物
8 d, S2 y4 |! Q3 ]/ R; [$ S第五节杂交瘤技术与单克隆抗体制备技术
' ]+ T* m. D T w( }5 Q/ g一、杂交瘤技术
+ E# h6 ^% V4 A T2 w# C% ?(一)B淋巴细胞杂交瘤技术的实验流程
1 u; K" M- O( L; F' f(二)应用于杂交瘤技术中的培养用液
) T1 T3 |9 W' U- { P) q2 s(三)杂交瘤细胞的染色体分析# c/ F' x5 f7 R2 c* e, R
二、单克隆抗体
, d, Z. Q" J0 s3 Y; S8 Z(一)单克隆抗体的概念/ R [; @* J! H. n
(二)单克隆抗体的鉴定" w) i* ?5 {4 U: w% E- W
(三)单克隆抗体的生产和提纯7 V1 D7 X* b5 q
(四)单克隆抗体技术的发展
3 ], ~9 Q8 e6 C' ]; O第二十章动物细胞大规模培养
; @- u, z9 }2 U& }7 Q! a, R第一节动物细胞培养有关的特性
3 i0 B5 i; f# _5 [. |# v4 J一、动物与微生物细胞的差别
6 s5 ~ B4 @0 o- f+ @0 c' t二、动物细胞生长特性
* b ^. E2 W f) K1 u1 r9 Q( o' M6 y第二节发酵) J( Q9 V5 s/ D8 a; N1 A
一、培养方法5 N6 s# _( u: p# S6 @) j; v0 p
(一)贴壁培养
5 [' o; K: h3 b(二)悬浮培养; e, L7 d, I9 W2 V4 f
(三)固定化培养
1 Z6 k0 z# c, _4 c1 P1 R1 r二、动物细胞培养的发酵工艺8 g* C. I! N+ T0 T; N# v
(一)分批式培养
8 I% O; J) U. L. _: ~, R$ _9 K(二)流加式培养3 P2 Y8 h" w1 n* j8 T
(三)半连续式培养
& N! I1 o0 z# D# u(四)连续式培养: L( g8 O/ \9 g& G5 R
(五)灌注培养 D U$ k8 e( @: D7 l. E0 u# o6 v
三、发酵工艺条件及其控制4 Q2 P6 M# I- I0 h
(一)培养基& e6 z1 F2 h8 e
(二)培养温度的调节控制$ t( m' g3 J! X' j: u& P3 D4 l
(三)培养液酸碱度的调节控制9 ~ T( O4 G$ c9 l; d; E# B: l
(四)溶解氧的调节控制7 h9 b: R' ~& ?
四、动物细胞大规模培养用生物反应器
9 i8 R' D$ N9 f- _( l9 j(一)搅拌罐生物反应器; `7 s$ X( _# c/ {0 y3 S
(二)气升式生物反应器
1 X& f4 r: G2 b8 ~(三)鼓泡式生物反应器
( Y+ E7 e! B1 R0 m/ ]( P- h(四)中空纤维生物反应器/ m J" d2 b# j( K) w
第三节动物细胞微载体培养技术; a% k. u; Z$ g; F
一、动物细胞在微载体表面的贴壁生长机制
" }- W% t3 |7 N5 f0 c二、微载体的主要特性# b. g2 z1 F* i$ {
三、微载体的种类及其性质
' f- j2 l, _( ?/ Y+ H% q# _$ M(一)交联葡聚糖为基质的微载体: i7 c0 a5 S5 f& X f- I3 H' H
(二)塑料为基质的微载体: P% U* h! C0 [8 v3 G c
(三)明胶/变性胶原微载体% [, { d; \% T `. `
(四)玻璃为基质的微载体/ R" j, G0 H; |5 N0 |
(五)纤维素为基质微载体
3 {! `. X ~% U(六)液膜微载体
+ s' h' z, @4 E% r6 `# n(七)大孔微载体! H0 x4 ^7 _' S0 w9 s/ r. K
四、微载体的选择/ d _2 G: D9 Q% d Y' x2 |
第四节动物细胞大规模培养技术的应用
! N' C- ]! [4 \一、在疫苗生产上的应用! g/ ~) h" d% ^- U; T2 R V0 d
二、在干扰素生产上的应用: i3 h2 }) D/ U) \
三、在单克隆抗体生产上的应用/ Y. e7 W/ }7 s; S8 v# H5 k- ]3 P0 [
四、在其它基因重组产品生产上的应用
: d4 l& p9 a% P* U* R第五部分植物组织细胞的培养
4 K: {) e/ ]( m; Q- Q6 L8 |5 W第二十一章植物组织细胞培养的基本原理与技术( {7 n |1 t/ G' X" P& A! Y1 L
第一节植物组织细胞培养技术的概念和类别) J9 z# o% g" I: n9 J
一、植物组织细胞培养的基本概念
6 }$ _0 G* [* K* E# i, w二、植物组织细胞培养技术的类别5 ~* e3 s8 n6 q# X( s
第二节植物组织培养技术的发展简史6 D; `# A3 z4 y
一、植物组织细胞培养技术的创立阶段
4 X/ F; J0 M9 F ~: u+ R二、植物组织细胞培养技术的发展阶段
$ C* H7 O) X5 W0 ?# {/ J" P三、植物组织细胞培养技术的应用研究阶段 Z8 a$ G8 T$ U
第三节植物组织细胞培养技术概述; G3 t: }. ?* B( q2 z* Q
一、植物组织细胞培养的基本条件& V6 ]2 C: r( u- F
(一)植物组织细胞培养的营养条件1 h ~* P# N6 h* @3 K* ^: {
(二)植物组织细胞培养的环境条件& y7 P6 z7 i; b* H+ l$ H, S) n% p
二、植物组织细胞培养的基本方法和技术
3 q4 v- `% d1 y( [- u0 U" t# h(一)植物组织细胞培养的基本方法
0 ?) o6 B( m, ?8 ]6 X4 ^! _& m(二)植物组织细胞培养的基本技术3 _0 a# P8 D' g6 _- q5 ]
三、植物组织细胞培养的基本程序
7 ~: Z6 r- w& n3 w1 a- u四、植物组织细胞培养物离体生长的基本方式' w* S8 `2 H7 j- v, s) H
(一)直接芽分化的方式$ @- a# i* ~0 @ ^& c3 b! S8 |
(二)通过愈伤组织形成的方式) ^% E% V) u, [+ m% X
(三)胚状体形成的方式
+ B5 U8 l# H e7 V7 h五、植物组织细胞培养物的鉴定# r- z% W* V/ I
(一)植物组织培养物的组织学观察
, U6 K$ k, G; Q0 `(二)植物组织培养物的染色体观察
: [: n8 G9 Q" m+ @3 ]) B六、植物组织培养技术与动物组织培养技术的异同, o3 u# O! ?0 F2 b( q; X* b
第四节植物组织细胞离体培养时的生物学特征+ T- B0 p; C3 j% V, k( y1 W
一、植物组织细胞离体培养条件下的全能性. O: ?) ]; l5 p: Q+ |8 G$ S+ F
(一)植物组织细胞的全能性具有普遍性
! a; O0 n& Q1 Z5 t' w7 a7 \7 M(二)植物组织细胞全能性实现的途径9 `0 r5 P, t7 @: N: K1 \8 n+ H
二、植物组织细胞离体培养条件下的突变性
, P; a' U9 K) B9 I, Q# r(一)植物组织细胞的变异性具有广泛性
( q% y2 h0 r$ ~$ r) P(二)离体培养的植物组织细胞变异机制
: V4 y1 n) t3 R+ h三、植物组织细胞离体培养条件下的类减数分裂现象
" p0 Z# I9 O1 U, l$ m# c( s(一)植物组织细胞类减数分裂现象的存在
' Q _' z) i& G$ P# ~(二)体细胞类减数分裂发生的机制
/ D$ B8 G0 h5 j" ?第二十二章植物组织细胞培养各论
! u4 K8 o+ |9 Y3 j e1 w第一节植物的胚胎培养
5 y$ D, \7 P4 \ E7 S一、植物胚胎培养的概念' g3 Y& V% N* Y4 v! v0 C& D$ f" D8 ?! t
二、植物的幼胚培养
4 k) f; U; f# S% v& {* s( n; z ]$ m(一)幼胚培养的基本过程0 C6 J5 i# A* L L
(二)植物幼胚培养的实例# ^3 P, ^: X' o4 n; O7 g9 `
三、植物的成熟胚培养
1 f$ A: W* G* t5 E k四、植物的胚珠培养
" L0 v3 c' |9 k3 v; N7 k(一)胚珠培养的基本过程. G8 b' O1 |* s
(二)胚珠培养的实例
6 [ p+ d) B+ v" a0 k* Y五、子房的培养* }+ q! l9 @3 g1 S1 d. @
(一)子房培养的基本过程
- t5 W3 w; ] c5 \$ N& t4 N(二)植物子房培养实例5 T p& \! @; o* {" J5 t
六、植物的胚乳培养
# b! [; H7 w9 C(一)胚乳培养的基本过程
/ y& Y$ N- A$ j) [" v(二)植物的胚乳培养实例! [( D: f) ?& y# U* W
第二节植物的器官培养
8 K, @( E2 ?* G2 X% O一、植物器官培养的概念8 Y2 S( r e7 B
二、离体根培养 g e% I3 r1 Y0 V: t6 n% {
(二)根培养的基本过程
/ e1 |+ [" |6 j6 m4 [/ ?8 g' ?$ X(二)植物离体根的培养实例
) @2 J4 I' }% x u* @8 O" i# J三、离体茎培养
' m' g) P9 N# [% |6 z(一)离体茎培养的基本过程0 K$ b0 c5 ^/ W6 ~1 F5 \
(二)植物茎尖培养的实例& \* L5 `! M$ `% ~$ j
四、离体叶培养: A& I. ]) @' |! @3 v6 u. U* I
(一)叶培养的基本过程% z# L9 R/ w! g, ?! _+ H
(二)叶器官培养的实例
0 a% V! `4 {2 w五、植物花器官的培养' A: V( g, {# [
(一)花培养的基本过程
: L( w- L. n! M" p$ W# E+ K(二)花器官培养的实例
* P0 t" L: Z4 |0 I1 H1 l7 X0 z! Z2 f六、植物种子和果实培养
4 f5 \1 s* B9 f9 \( d(一)种子和果实培养的基本过程
' q" V! D0 R, Q) C. o(二)植物种子和果实培养的实例8 ? O+ d# [( y. u0 H. c
第三节植物的组织培养
# ^1 A6 T- i4 j; z( @) G2 J6 O& |一、植物的组织培养概念
* X/ _$ E! `+ s3 s7 s& Z5 f Y+ K二、植物愈伤组织的培养, s% R5 j& t4 l w' F3 C
三、植物胚性愈伤组织的培养
* A, e; ]0 U4 G0 a0 `2 R h; }(一)植物胚性愈伤组织培养的基本过程
# E$ \% }1 w7 g, L7 F(二)植物愈伤组织培养及植株再生实例
/ r1 a2 X0 |7 s) ~9 `3 s第四节植物的细胞培养
/ c* \) N- I; x# @一、植物细胞培养的概念
; s& L/ k7 Y! K& x9 q: {二、植物细胞悬浮培养! u" h; z. _1 j0 Z" N; R
(一)植物细胞悬浮培养的基本过程
" J e. L. A! G( S" ?; Z' p& \(二)悬浮细胞的培养实例8 ~/ i# o6 g6 j# x
三、植物的单细胞培养
; @# b4 ?9 {7 @* Y(一)植物单细胞培养的基本过程# t' S6 Y; s" A! K# w- b
(二)植物单细胞培养实例
. @3 z: z) M3 M2 p4 E# H; c5 d! d第五节植物的花药与花粉培养* q$ X6 O- _9 }( `+ P1 J3 Q$ p
一、植物花药与花粉培养的概念: ]. A2 J7 ]" k! N6 }
二、植物的花药培养
7 a3 O6 n6 _- s3 q$ r/ f3 e3 V5 {" d! Q(一)花药培养的基本过程
: w1 ]/ S6 i1 u/ v: y7 R(二)植物花药培养实例3 n4 j z/ @+ s4 D/ R) b$ n- e- ~+ y
三、植物的花粉培养
2 b$ S# j/ y- O8 {' E9 g9 G(一)花粉培养的基本过程
7 o" |1 w3 F3 r% o' P w6 I(二)植物花粉培养实例! N. }+ I6 ? |' z
第六节植物的原生质体培养; N: M2 x0 o: G9 L
一、原生质体培养的概念5 t& n7 j3 u+ A( Y( y$ O1 `) C; v9 B
二、原生质体的培养2 x C4 k1 x/ h- u7 D' J# f
(一)原生质体培养的基本过程
/ |' e C, z. p- M. J5 A# s(二)原生质体培养实例6 [3 Y' I8 c4 g Y0 Y" ^+ Z
第二十三章植物组织细胞培养的应用# p" b! N! \. Z; P9 w, N/ C# z
第一节植物组织细胞培养的应用技术
% ]: v) F: _" s3 i/ Q) B一、植物基因转移技术. U0 K4 j5 [/ {6 L9 j. ?8 z7 ?
(一)植物基因的获取
9 W: r+ t) V- b(二)植物基因的载体! Q; H2 }7 \: c8 J2 c2 L
(三)植物基因的转移方法
0 z& @/ [) t" u% m' d P, t5 k(四)转基因植物的检测
( B" M+ ^3 M1 O(五)植物基因转移实例
" P% [" G, x t& a- @1 L2 H z* e二、植物体细胞融合技术7 B% q2 V/ y8 X' D% m5 x; x+ ?2 k
(一)原生质体融合的基本方法
9 r. o5 m: N, V4 k% R(二)原生质融合体的生长发育& \+ z2 [4 x# d
(三)原生质体融合实例% l' d# t+ f6 X9 ^: ?- L) Z
三、植物体外受精技术
2 @9 }4 U& S- W" a$ w9 I四、快速繁殖植物技术
7 L/ V( G9 E w9 r8 x8 N第二节植物组织细胞培养在农业上的应用
) T) f! H8 c. q0 C9 v一、利用植物组织培养技术改良植物品质* r0 i# {3 T: K, H3 V! x
(一)利用植物组织培养技术进行倍性育种
4 F% Y% [' {; L4 Y# L/ \: o(二)利用植物组织培养技术进行远缘杂交育种4 u5 Y% e/ F. ]0 X
(三)利用植物细胞培养技术进行突变育种
" s. w# T* u- d3 w二、利用植物组织培养技术培育脱毒植物
/ P: e; O# L5 @+ S: I6 X ^$ A% m(一)利用茎尖培养技术进行植物脱毒" o& k$ [; o. }
(二)利用植物组织培养技术进行植株脱毒
- T9 ~5 \8 t e+ Z$ n(三)利用植物组织培养技术快速繁殖植物* r' x5 i2 U" G$ d
三、利用植物组织培养技术保存植物种质
- z4 p* M4 F( ~(一)植物组织细胞超低温保存的优点" n% Z8 c: B+ c2 ^- J; c
(二)植物组织细胞超低温保存技术
; ^! F% o6 g4 `- P8 D7 {" ]* v(三)植物超低温种质保存实例/ M' g7 H& J6 K& T
四、利用植物组织培养技术合成人工种子0 f7 n) M( e& Y5 ^
(一)人工种子的特点
: X W" X) A, o I2 U+ \6 ~, ?(二)人工种子的应用前景
- } R! W- J, }0 |) W( }(三)人工种子制作的基本技术: U. W7 u, U4 Q9 P# o
(四)人工种子制作实例$ o& z" w* S! j
第三节植物组织细胞培养技术与植物产品生产
8 j( O6 R, H1 {+ L一、利用植物组织细胞培养技术工厂化生产试管苗+ {9 h. O, g1 Q
(一)用植物组织细胞培养技术建立植物的无性系9 D7 m: R/ K/ Q( |4 ]5 S
(二)试管苗工厂化生产实例
* Y7 T y; {3 S; t5 ? E- q/ Y二、利用植物细胞大量培养技术生产植物产品
3 ^8 e2 p" U( K3 ^8 Q9 Q% e2 e(一)培养的植物组织细胞积累次生代谢物的特点9 ^0 j- H+ o. g# s& V9 D
(二)培养的植物组织细胞积累的次生代谢物之类别0 l+ o* j) {: H. B7 H* b4 U
(三)利用植物组织细胞培养技术生产次生代谢物的方法
0 J O8 Y/ S, C, G# M: B! i5 |(四)利用植物组织细胞培养生产次生代谢物的实例
' f* [' v4 L$ R& }第四节利用植物细胞培养技术生产植物药
( I. ` v) k8 i3 U0 P. r一、利用植物细胞培养技术生产植物药的优势和不足
" o+ `# U1 [3 l二、利用植物组织培养技术生产的植物药的类别
; f/ Y9 Z+ \' K4 c' \0 ~三、植物药物生产的主要技术
- ^& x/ d; J; V2 j) p# j- J" [(一)发状根培养技术
) s: x0 s0 i+ ? K+ L/ Y(二)两相培养技术
0 Y7 E0 m. _9 @$ z(三)反义技术* H, j' Q( g9 t' b" ?% P" ?9 Y
四、利用植物组织细胞技术生产植物药的实例% z5 ~4 A, J0 m1 w! T$ e" N1 c
五、植物药工业化生产实例9 r. V7 \; C1 @( W' `+ \
附录
) u* m- b/ B" O) T- [, s4 J附录Ⅰ无血清培养基及添加剂供应商一览表9 ^. I+ d" F6 g. @$ V
附录Ⅱ水合物的等量值表6 ]( c* M- @0 m0 Y
附录Ⅲt界值表* l1 L6 d4 m! e
附录Ⅳ离心机转速(r/min)与相对离心力(RCF)的列线图
: f7 W0 B1 S7 @. A3 r |
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发表于 2011-3-20 08:51
发表于 2011-3-21 11:20
