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楼主: yangjie0329	go [讨论] Western Blot 封闭是用脱脂奶粉好还是用牛血清白蛋白好 [复制链接]

yinglangbeijing

新手上路

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11楼

发表于 2011-3-14 00:55 |只看该作者

300mA 1小时左右。可适当修改时间。摸条件情况时，可通过染胶，染膜，看marker的转印情况，甚至染滤纸的情况，来看转膜是不足还是转过了。
封闭，室温30分~1小时，我们做的一个小时。有见别人做40分钟的。
一抗可用封闭液稀释，二抗用PBST稀释的，呵呵。

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shewawa

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12楼

发表于 2011-3-14 10:42 |只看该作者

据说是和抗体使用情况有关，有的抗体不可以用5% skin-milk，要用BSA。但是据说skin-milk的blocking能力很强，出现非特异性band比较少。我们实验室用5% skinmilk RT 15min 或者4度 over-night,效果很不错，有兴趣的同仁们欢迎试用。本人做过很多次效果很好。