经冠脉移植骨髓单个核细胞和间充质干细胞治疗急性心肌梗死的对比实验研究 - 国内文献区干细胞之家



免疫细胞治疗专区	欢迎关注干细胞微信公众号

12 3 4 5 6 7 8 9 10 ... 23 下一页

返回列表

查看: 433092\|回复: 229	go 经冠脉移植骨髓单个核细胞和间充质干细胞治疗急性心肌梗死的对比实验研究 [复制链接]

文献管理员

版主

Rank: 7 Rank: 7 Rank: 7

积分: 8
威望: 8
包包: 898

楼主

发表于 2009-3-3 12:32 |只看该作者 |倒序浏览 |打印

作者：李树仁  齐晓勇  史力生  王建军  刘会良  孟存良  王天红  张建清  党懿  李英肖  郜利会  靳福昌作者单位：河北省人民医院心脏中心，河北  石家庄  050051 - S# o& f" i* {/ J" D2 Z
   6 e) J' n& K6 i
   0 p, [7 E* O3 L; B! X, C8 f7 r& x
      - |% i4 D4 Q0 j' Y  J) p
                     1 A1 z: H5 V9 U( v0 v, f
         0 J' [$ r+ `; o
                  : G* b! J1 s! ~* G* ~1 k




      ( L0 s- y) {5 N( \
      【摘要】  目的  对比研究经冠脉骨髓单个核细胞（BMMNC）和间充质干细胞（MSC）移植对实验性急性心肌梗死（AMI）心功能的影响及其机制。方法  选用12只雄性冀中白猪随机分为：正常对照组、AMI模型组、BMMNC组、MSC组各3只，经导管球囊封闭前降支制作AMI的动物模型，于梗死后1 h直接冠脉球囊成型术后经OTW球囊注入骨髓干细胞。分别于术前及术后4 w经心脏超声检测心功能，4 w后取材行光、电镜病理学检查，实时定量RTPCR检测心肌血管内皮生长因子（VEGF）和碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）mRNA表达。结果  4 w时干细胞组比AMI模型组室壁运动异常指数显著减轻（P＜005）、射血分数显著提高(P＜001)。与AMI模型组相比：BMM；NC和MSC组梗死区及梗死边缘区血管数显著增多、BMMNC组增加比MSC组显著（P＜001），心肌细胞凋亡指数显著降低，BMMNC组及MSC组间无明显差异(P＜001）。干细胞移植组梗死边缘区冠脉血管周围可见异常细胞生长，有毛细血管“芽生”现象，可见不成熟的心肌细胞和细胞凋亡。4 w时左室射血分数（LVEF）与心肌血管数成正相关（r=0694 9,P=0037 7），LVEF与心肌细胞凋亡指数成负相关(r=0913 3,P=0000 6)。BMMNC组，心肌梗死区及梗死边缘区VEGF基因表达比其他三组均明显增加（梗死区F=423，P=0045 6，边缘区F=566，P=0022 3）。BMMNC及MSC组心肌梗死区bFGF基因表达比梗死模型组显著增加(梗死区F=749，P=0010 4)。结论  经冠脉骨髓单个核细胞和间充质干细胞移植均可改善实验性AMI心功能;改善心功能的机理与梗死区及梗死边缘区VEGF及bFGF表达增加,血管密度增加,心肌细胞凋亡减少有关；骨髓单个核细胞移植的促血管增生作用优于间充质干细胞移植。
      【关键词】急性心肌梗死；血管成型术；经腔；造血干细胞；细胞移植: a4 }- y, s, e: ^% C, a' Z
   　　Comparison study of intracoronary autologous bone marrow mononuclear cells and mesenchymal stem cells used in treatment of acute myocardial infarction. ^2 n) ~6 C& C3 y% ?  @

　　LI ShuRen, QI XiaoYong, SHI LiSheng, et al8 Q0 n7 X% a0 h" e, f- t) ^

　　Cardiology Center of Hebei Provincial People's Hospital, Shijiazhuang 050051, Hebei, China) j4 D& U8 V" j! n+ l7 @

　　【Abstract】ObjectiveTo study the effects and mechanism of intracoronary autologous bone marrow mononuclear cells (BMMNC) and mesenchymal stem cells (MSC) on the cardiac function of acute myocardial infarction (AMI).MethodsTwelve male white swine were randomly divided into normal control group, AMI group, BMMNC group and MSC group (n=3 each group). AMI models were made by transcatheter blocking left anterior descending. One hour later after AMI direct percutaneous coronary intervention was taken and bone marrow stem cells were infused into the criminal artery through over the wire (OTW) balloon. By the end of four weeks, cardiac function and light and electron microscope pathology were studied, at the mean time VEGF and bFGF mRNA expression were detect by quantification realtime RTPCR.ResultsBy the end of four weeks, wall motion index were significantly decreased (P＜0.05), LVEF were significantly increased in stem cell transplant groups, the number of blood vessel were significantly increased (infarcted zone F=65.50, P=0.000 1, marginal zone F=59.67, P=0.000 1) and myocardial apoptotic index were significantly decreased (infarcted zone F=16.61, P=0.000 8, marginal zone F=17.89, P=0.000 7) on infarcted and marginal zone both in BMMNC group and mesenchymal group than those in AMI group. Abnormal immature myocardial cells, apoptosis cells and blood capillary gemmation were found in marginal zone by light and electron microscope. At four weeks LVEF had a positive correlation to myocardial capillary density（r=0.694 9, P=0.037 7） and had a negative correlation to myocardial apoptotic index (r=0.913 3, P=0.000 6). The myocardial mRNA expressions of VEGF both in infarcted and marginal zone in BMMNC group were significantly higher than those of the others (infarcted zone F=4.23, P=0.045 6, marginal zone F=5.66, P=0.022 3). The bFGF expression in infarcted zone both in BMMNC group and MSC group were significantly higher than those in AMI group (F=7.49,P=0.010 4).ConclusionsIntracoronary transplant autologous BMMNCand MSC can improve cardiac function in AMI swine. The increased myocardial VEGF and bFGF mRNA expression and capillary density and decreased myocardial apoptosis might play an important role in improving cardiac function. The effects of BMMNC transplantation on angiogenesis could be surpassed to those of MSC.

　　【Key words】Acute myocardial infarction (AMI); Angioplasty; Transluminal; Hematopoietic stem cell; Cellular transplantation
* G; |6 Y* C6 R& W
　　骨髓干细胞移植治疗AMI是目前研究的热点。骨髓干细胞有骨髓单个核细胞群(BM MNC)、ACl33阳性细胞群、间充质干细胞(MSC)和内皮祖细胞(EPC)等。研究发现BMMNC移植可增加心肌血管新生，改善心功能〔1〕。MSC移植后可在大鼠的梗死心肌内存活6个月，并表达肌肉和内皮细胞特征性蛋白，其对整体心脏功能的改善在术后4 w时明显，到术后6个月时消失。应用GCSF动员后，移植动员后的外周血单个核细胞，发现可明显改善梗死心脏功能，但可加重支架内再狭窄、引起造血系统过度增殖。目前此项研究尚存在以下问题：移植的骨髓干细胞的驻留存活及横向分化能力，能否分化成具有心电活动的心肌细胞；分化的移植细胞与宿主细胞之间能否建立电机械收缩偶联；骨髓干细胞移植治疗急性心肌梗死的最佳途径及移植方法；移植后的安全性问题。本研究采用经冠脉导管注射的方法进行骨髓单个核细胞和间充质干细胞移植，方法更适用于临床；采用电镜及RTPCR的方法对骨髓单个核细胞和间充质干细胞移植进行系统的对比研究；研究干细胞移植对AMI心功能的影响及其机制。0 r/ n# U! h5 o  w$ i5 \2 N

　　1材料与方法

　　11骨髓干细胞提取及标记（1）骨髓单个核细胞：采用Fercoll法分离获得骨髓单个核细胞，移植前1 d以盐酸氯胺酮200 mg臀部肌肉注射麻醉后，在猪右侧股骨抽取骨髓20 ml，用磷酸盐缓冲液冲洗后将细胞吹散，加入淋巴细胞分离液2 000 r/min离心30 min,取出中层含有骨髓单个核细胞成分的细胞层，加入磷酸盐缓冲液洗涤、稀释，调整细胞密度为6108/ml。胶体金的制作：将100 ml 01%氯化金水溶液加热至沸腾，迅速加入45 ml 1%柠檬酸三钠水溶液，继续煮沸10 min，制得约12 ml胶体金,高压灭菌。将500 ml M199培养基溶于250 ml三蒸水中，过滤除菌，加入等量胶体金溶液，再加入20%胎牛血清（杭州四季青公司），与骨髓单个核细胞共同培养12～16 h。（2）骨髓间充质干细胞（MSCS）：按上述操作抽取中层液体至离心管中，加入含肝素生理盐水10 ml，混匀，2 000 r／min，5 min，弃上清，重复2次；沉淀加入含20%胎牛血清(Gibco)，10 ml双抗(青霉素、链霉素)的完全培养液(Sigma)，吹打均匀，加入75 cm 培养瓶中，37℃5%CO2细胞培养箱(Forma)培养；完全培养液中加入10 μmol/L 5氮胞苷，24 h后，吸去含5氮胞苷的培养液，用Tyrode氏平衡液继续培养，MSCS贴壁生长，每3 d换液一次，留下贴壁生长细胞，1 w后细胞几乎完全融合。移植前1 d与前述胶体金标记液共同培养24 h，手术当天用001 mmol/L PBS缓冲液漂洗细胞6次，用胰蛋白酶消化后离心收集细胞、记数后加入完全培养液以备移植时使用。" |% B" K* ^8 T- N/ M

　　12猪AMI模型的建立选用体重20～30 kg的雄性冀中白猪（购自河北省医学科学院动物中心），以200 mg盐酸氯胺酮肌肉注射麻醉后，称重，建立静脉通路，以50 μg·kg-1·min-1氯胺酮维持静脉麻醉，解剖右侧颈内动脉，采用seldinger技术穿刺右侧颈内动脉留置6F鞘，鞘内给肝素3 000 U,以6FJR40大腔导引导管行冠状动脉造影，之后以球囊∶血管直径=11∶1的比例选择OTW球囊在第一对角支以远压闭左前降支，造成AMI动物模型。. ?% ]9 T+ }2 B6 y
% V! j7 c% m1 i/ Y& J( R
　　13动物分组12只小型猪随即分为（1）正常对照组（3只）：术前行心电图、心脏超声检查，饲养28 d复查后取材研究。（2）模型组（3只）：制作前壁AMI模型，梗死1 h后开通前降支，经球囊注入10 ml磷酸盐缓冲液。(3)单个核细胞组（3只）：AMI模型制成并开通前降支后经球囊注入预先分离的骨髓单个核细胞6108个。（4）间充质干细胞组（3只）：AMI模型制成并开通前降支后经球囊注入预先分离的间充质干细胞6108个。
: }) i! |5 ?4 m0 C% t7 W$ i
　　14心功能检测分别于术前及术后28 d，由同一专业医生行心脏超声检测，记录心脏各房室腔径、室壁厚度和室壁运动情况，应用Teichholtz公式计算左室射血分数和短轴缩短率。室壁运动异常指数（WMSI）标准如下：正常为1，室壁运动减退为2，室壁无运动为3，室壁反常运动为4，室壁瘤为5。

　　15光、电镜病理学检查四组动物分别于饲养28 d后，行颈部放血处死动物。于心肌梗死区、梗死边缘区、正常心肌区按要求取材后分别置于液氮、10%福尔马林、4%戊二醛内保存，备行PCR分析，光、电镜检查。微血管计数：每张切片在200倍高倍视野随机观察三处进行血管计数(个/02mm2)，有一个中心腔的圆形或类圆形结构计数为一个血管，取其平均值。电镜检查：取1 mm3大小的心肌组织置于4%戊二醛固定2 h后，丙酮逐级脱水，环氧丙烷置换，618液包埋，LKB V型超薄切片机切片，枸橼酸铅染色，HITACHI H500型透射电镜观察研究（河北医科大学电镜室）。! o  V) D) Z* G% r$ T" j8 t- d3 p

　　16实时RTPCR检测应用实时RTPCR方法于AMI后28 d分别在梗死区、梗死边缘区及正常心肌部位取材，检测心肌VEGF、bFGF mRNA的表达。(1)RNA提取与cDNA的合成：取100 mg上述部位心肌组织采用Trizol一步法使用TaKaRa RNAiso Reagent试剂提取Total RNA,用DnaseI处理、精制后使用。（2）构建标准品：分别构建管家基因（βActin）和目的基因（VEGF基因和bFGF基因）RNA标准品。具体操作如下：①引物设计：在猪VEGF基因、bFGF基因和βActin基因序列上分别设计引物，并在上游普通PCR引物的5′端加上T7启动子，下游普通PCR引物的5′端加上25个T，使构建的标准品RNA有Poly(A)尾。②获得体外转录模板，体外转录获得RNA标准品。（3）实时PCR法检测猪心肌VEGF基因、bFGF基因相对表达量。将构建的管家基因beta actin和目的基域VEGF的RNA标准品分别梯度稀释（108、107、106、105、104copies/μl），将构建的目的基因bFGF的RNA标准品梯度稀释（107、106、105、104、103copies/μl）作为模板进行实时PCR反应，分别制作管家基因beta actin和目的基因VEGF、bFGF的标准曲线。采用SYBR GreenI荧光染料嵌合法，以构建的RNA为标准品，分别对管家基因（βactin）和目的基因制作标准曲线，利用标准曲线对样品中的管家基因和目的基因分别进行定量。通过管家基因的校正，检测样品目的基因的相对表达量。βactin上游引物：5′GCACCACTGGCATTGTCAT3′，下游引物：5′TTCATGAGGTAGTCGGTCAGGT3′。VEGF上游引物为5′GCCTTGCCTTGCTGC

TCTAC3′，下游引物：5′GGGCACACACTCCAGACCTT3′。扩增片段长度254 bp。bFGF上游引物：5′GCGACCCTCACATCAAA
) [  ?& u1 H8 e& x, F$ C. Y
CTACA3′，下游引物：5′AGCCAGTAATCTTCCATCTTCCTTC3′，扩增片段长度为113 bp。RT反应条件为：42℃10 min,95℃2 min。PCR反应条件为：95℃10，95℃5，60℃20循环45次。根据下列公式以Ct值计算各基因的起始模板浓度：起始模板浓度=2-△Ct〔-△Ct=目的基因Ctβ肌动蛋白（actin）Ct〕。4 c0 r' [7 j4 U, s
2 I$ _8 O* b3 f# K4 @
　　17统计学分析计数资料采用x±s表示,统计方法采用方差分析和q检验。统计分析在SAS612软件进行。
4 [, ~: E0 f3 v/ ?  M8 I5 b
　　2结果
( _3 Z3 B- [- ~5 u% C# g
　　21心功能变化（1）经超声检查，实验前三组间室壁运动异常指数无明显差别。实验4 w后，AMI模型组与正常对照组及干细胞组相比室壁运动异常情况明显加重。(2)实验前三组间EF均无明显差别，实验4 w后,模型组比对照组及干细胞组EF值明显降低，干细胞组与对照组相比EF值无明显差别（表1）。
9 T" n$ U% o/ `( }; ?+ k) Y& v4 y3 M
　　22病理学改变

　　表1移植前后心功能的变化（略）( m& ?% d" ~% p5 ~: s( [; a
3 X) S: }; y* e* n( J
　　221光镜病理改变干细胞移植组：在梗死纤维化区和梗死边缘区可见大量血管增生，非梗死区血管较少(图1A)，梗死边缘区冠脉血管周围可见异常细胞团生长并有大量炎细胞浸润(图1B、图1C)。间充质组：梗死纤维化区及梗死边缘区血管增生较多(图1D)。模型组：梗死及边缘区血管数量均比干细胞组少，无异常细胞生长(图1E)。正常对照组：肌纤维排列整齐，血管数量少(图1F)。# ^, S; n2 ^' r) l# u% W

　　222电镜下病理改变干细胞移植组：可见毛细血管“芽生”现象，毛细血管内皮细胞的细胞质向管腔突起与对侧相接，对接处细胞膜相互融合，将血管腔分割成两部分(图2A)。在梗死边缘区可见不成熟的心肌细胞，胞核较小，核形态幼稚，胞质中有散在肌丝结构，肌丝排列紊乱不规则，横纹不清晰,细胞器少(图2B)。梗死边缘区可见细胞凋亡，心肌细胞核染色质浓缩、电子密度增加、边集于核膜下厚薄不均，心肌纤维水肿，线粒体空化和髓样化(图2C)。正常对照组肌纤维排列整齐，可见闰盘结构(图2D)。
! U' t7 _$ B( l7 y; I5 r
　　A(HE200)，B、C(HE400)为单个核干细胞组，D(HE200)间充质干细胞组，E(HE200)梗死组，F(HE200)正常组心肌+ g) q4 H9 _; Z2 s
; N/ q4 G& o7 r+ |4 z: B
　　图1光镜病理改变（略）

　　A(120 K)单个核干细胞组，B(70 K)间充质组，C(40 K)梗死组，D(100 K)正常对照组, A% X  ^" ]: C. J, ~

　　图2电镜病理改变（略）0 M) V% X! P0 r2 @/ [* d

　　223血管计数分别于梗死区、梗死边缘区、正常区的心肌切片，每张切片在200倍高倍视野随即观察三处进行血管计数(个/02 mm2)，有一个中心腔的圆形或类圆形结构计数为一个血管。①梗死区及梗死边缘区：梗死模型组、单个核组、间充质组及对照组间血管数均有明显差异（梗死区F=6550，P=0000 1，边缘区F=5967，P=0000 1）②无梗死的正常心肌区：单个核组与对照组相比血管密度显著增加，单个核组、间充质组及梗死模型组三组相比均无显著差异（F=493，P=0037），见图3。
: m8 F* {( ~$ w* ^- x! n
　　224心肌细胞凋亡在电镜下观察心肌细胞凋亡情况：①梗死区：梗死模型组、单个核组及间充质组与对照组相比心肌细胞凋亡指数显著增加，单个核组及间充质组与梗死组相比心肌细胞凋亡指数显著降低，单个核组及间充质组间无明显差异（F=1661，P=0000 8）②边缘区：心肌梗死模型组与其他三组相比凋亡指数明显增加，单个核组、间充质组、正常组三组之间相比心肌细胞凋亡指数无显著差异（F=1789，P=0000 7）。③无梗死的正常心肌区：四组之间心肌细胞凋亡指数相比均无显著差异（F=044，P=0727 8），见图4。8 o9 A; v. F  h  |" n# K7 L$ b# E$ u
2 F2 s4 q6 G1 p, a- e
　　图3心肌血管计数（略）, B  p0 i& p, H9 P0 r+ O6 |
3 K8 h8 K# r9 {5 v- J8 s
　　图4心肌细胞凋亡指数（略）( t  }- I' b$ B) O" v
+ `4 h* `; P0 f" d+ a
　　图5VEGF基因扩增、融解及标准品曲线（略）

　　图6bFGF基因扩增、融解及标准曲线（略）

　　23心功能与血管密度及心肌细胞凋亡的相关研究AMI 1个月时LVEF与心肌血管数（梗死区、边缘区、正常心肌区的均数）呈正相关（r=0694 9,P=0037 7）,直线回归方程为：y=37590 7 0589 6 x。LVEF与心肌细胞凋亡指数呈负相关(r=-0913 3,P=0000 6)，直线回归方程为：y=69959 8-3490 7 x。8 g& u4 x, I! [  n/ n9 i

　　24实时PCR法检测猪VEGF基因和bFGF基因相对表达量见表2，表3。$ I. k2 S& d% z8 z" @8 ^1 W! W, ~

　　表2干细胞移植4 w后心肌不同部位VEGF基因表达量（略）& q' D1 \5 }$ L' r- i

　　表3干细胞移植4 w后心肌不同部位bFGF基因表达量（略）! }( r! y* F, t' j- _

　　猪心肌组织基因扩增曲线、融解曲线及标准曲线良好。（1）单个核细胞移植组，心肌梗死区及梗死边缘区VEGF基因表达比其他三组均明显增加，模型组及间充质组VEGF表达与正常对照组相比增加但无统计学意义，正常区四组间VEGF无明显差异。（2）单个核细胞及间充质干细胞移植组，心肌梗死区bFGF基因表达无显著差异，而比其他两组均显著增加，梗死边缘区及正常区四组间bFGF无显著差异（图5，图6）。% q0 R6 D  @& |$ _

　　3讨论2 |+ s7 k* a" V$ [1 O4 Q

　　- @8 ~: `8 S8 G6 \" H
. N& L  |# ^0 s! a, S$ c
　　干细胞移植治疗心肌梗死是目前心血管领域研究的热点，主要集中在如下三方面：移植的骨髓干细胞的横向分化能力；分化的移植细胞与宿主细胞之间能否建立电机械收缩偶联；骨髓干细胞移植治疗的最佳时机及移植途径。2001年Orlic首次报道将骨髓干细胞成功的移植到心肌梗死动物模型〔2〕，随后Strauer等首次将骨髓干细胞应用于临床治疗，发现20例接受干细胞移植的心肌梗死患者心脏受损部位面积明显缩小、心功能明显改善〔3〕。Taylor等报道类心肌细胞移植到体内后心脏功能明显改善，移植细胞转分化为具有心肌细胞表型的细胞，这些细胞与宿主心肌之间以缝管连接相连〔4〕。与此同时相反的报道表明在移植的类心肌细胞与宿主心肌之间始终未发现缝管连接发育，移植细胞未分化为成熟的心肌细胞，未与宿主心肌细胞产生电的连接，移植片与心肌不同步收缩，可能会导致心律失常〔5〕。因此，干细胞移植治疗心肌梗死尚处在研究阶段，但大部分基础和临床实验已证实干细胞移植可明显改善受损心肌的心功能。本研究通过骨髓单个核细胞(BMMNC) 和间充质干细胞(MSC)移植的对比研究也证实了骨髓干细胞移植可改善28 d时心肌梗死猪的心功能，光、电镜病理检查在冠脉周围可发现类心肌细胞。
, e! H2 s; ^$ k: u
　　目前用于移植的骨髓干细胞有BM MNC、ACl33阳性细胞群、MSC和内皮祖细胞(EPC)等。BMMNC包括所有骨髓干细胞成份，如MSc、造血干细胞和EPC等，此类细胞容易采集、操作简单、不存在免疫排斥反应，适合于临床应用。2004年，Wollert等报告了纳入60例AMI病人的随机非双盲对照临床研究结果〔6〕,经过6个月随访发现骨髓干细胞移植组LVEF比对照组提高6%(P=00026)，并未发现临床不良事件、支架内再狭窄和心律失常现象。1985年，Piersma等证实从骨髓中分离的贴壁细胞可分化为成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞和成肌细胞，称为MSC，目前认为只有MSC能分化为心肌细胞。BMMNC改善心功能的机制：（1）BMMNC直接分化为血管内皮细胞和平滑肌细胞，形成新的血管；或以自分泌或旁分泌的方式分泌促血管生长的细胞因子，促进血管生长，最终预防或减轻左室重构。（2）BMMNC在心肌内存活并与心肌细胞之间形成藕联而同步收缩。骨髓单个核细胞植入心肌梗死及其边缘区后，在心肌梗死区促进15个血管生成相关基因表达上调超过3倍，而在边缘区则多达40个。骨髓单个核细胞植入心肌梗死及其边缘区使血管内皮生长因子、纤维细胞生长因子及血管生长素I等蛋白表达增加，于心肌梗死边缘区作用更加显著。（3）缩小心肌梗死面积。BMSCs移植后改善心功能的主要机制是BMSCs可以维持受损心肌的相对完整性使疤痕区组织增厚，增加疤痕组织的弹性，限制心室特别是疤痕区组织的扩张，抑制梗死部位心肌的重构过程〔7〕。有研究利用彩色Doppler超声心动图观察发现，在干细胞移植后6 w，收缩期和舒张期前侧壁和室间隔厚度均较对照组明显增加。由于增加了心室壁的厚度并且移植的细胞具有一定的收缩能力和弹性，因此可以阻止在心室舒张时心肌内胶原纤维的过度延伸以及心室腔的扩大。Youngsup研究发现，人类骨髓源多能干细胞移植后可在大鼠的梗死心肌内存活，并表达肌肉和内皮细胞特征，对整体心脏功能的改善、缩小心肌梗死面积、增加心肌血管密度、减少细胞凋亡〔8〕。因此，MSC的长期疗效如何有待大样本、随机双盲对照研究结果。
8 a6 ^; d3 A1 b& N
　　本研究对BMMNC和MSC移植治疗进行对比研究，发现BMMNC和MSc对AMI 4 w时心功能均有明显改善，两组间心功能改善无明显差异。心功能的改善与血管密度的增加正相关，与心肌细胞凋亡负相关。BMMNC和MSc移植均增加梗死区及梗死边缘区血管密度，BMMNC比MSc对血管密度的增加作用更显著，对非梗死区的血管密度无显著影响。BMMNC和MSc移植均显著降低梗死区及梗死边缘区心肌细胞凋亡指数，两组间对凋亡指数的影响无显著差异。经实时RTPCR发现BMMNC和MSc移植均增加梗死区及梗死边缘区VEGF基因表达，BMMNC比MSc上述作用更显著，两者对梗死区bFGF基因表达均显著增加。BMMNC组在冠脉血管壁有向心性异型细胞生长，而在MSc无类似现象。本研究经导管的方法制作猪AMI动物模型，采用经导管于AMI 1 h行直接冠脉球囊成型术后进行自体骨髓干细胞移植，移植方法更接近临床病人治疗的临床实际,为骨髓干细胞移植的临床研究及治疗提供了最佳的研究方法和可靠的理论依据。, r' N* v& u4 }
      【参考文献】: z- z8 C* w. _& X2 h) }
　　1  王伟民，孙宁玲，刘  健，等经冠状动脉注入自体骨髓单个核细胞的临床研究〔J〕中华心血管病杂志,2006；3(2):1036- d5 X: e; X3 G' ]$ h8 p: K

  E! B. R( }8 W; p" Y; T/ ~

　　2  Orlic D,Kajstura J,Chimenti S,et alBone marrow cells regenerate infarcted myocardium〔J〕Nature,2001；410(6829):7015

: w3 W' @0 u2 i, K7 y0 b

　　3  Strauer BE，Brehm M,Zeus T,et alRepair of infarcted myocardium by autologous intracoronary mononuclear bone marrow stem cell transplatation in human〔J〕Circulation，2002；106(15):19138

　　4  Richard B，Thompson MD，Sitaram M，et alComparison of intracardiac cell transplantation:autologous skeletal myoblasts versus bone marrow cells〔J〕Circulation2003;108(9):12647. D, g$ }2 j4 [
8 G) f2 R9 }' L9 o% c
+ h" j2 S3 ^6 c+ [1 N% f9 ^$ s& E' l4 {
% o+ n7 ^  o$ _/ z0 U; }6 T
　　5  Michael S，Lee MD，Raj R，et alStemcell Transplantation in myocardial infarction:a status report〔J〕Ann Intern Med,2004;140(9):72937

8 r  S) C* y' [8 A( l

　　6  Wollert KC,Meyer GP，Lotz J,et alIntracoronary autologous bonemarrow cell transfer after myocardial infarction:the BOOST randomised controlled clinical trial〔J〕Lancet，2004；364(9429):1418
3 K) o+ @! d( `9 q: Y( ?/ }
# `1 v. w$ G1 J5 V
- Z3 ^+ H4 G# j# v  P
　　7  Bittira B， Kuang JQ，AlKhaldi A，et al． In vitro preprogramming of marrow stromal cells for myocardial regeneration〔J〕．Ann Thorac Surg，2002；74(4)：11549．0 z/ ]5 k3 |% A1 M! E; U/ H! y

7 F' C' I6 v9 h' }
　　8  Youngsup Y，Andrea W，Lindsay H,et alClonally expanded novel multipotent stem cells from human bone marrow regenerate myocardium after myocardial infarction〔J〕J Clin Invest，2005；115(2)32638

收藏0 分享0 顶0 踩0