碱性磷酸酶染色

vae有何不可

这篇文献上的AP染色步骤较为详细，而且还附带了几张图。

yijuansss

DINGDING

zhbshi998

不错很感谢各位！

rubyrobin

谢了，正 找着

czzhaozhu

AKP染色具体步骤：
7 `& X8 e# ]: X5 [- [; W' }(1).        配制AKP缓冲液（100 mmol/L Tris-HCl，PH 9.5，50 mmol/L MgCl2，0.1% Tween-20）。
) I+ R& ^0 P7 x6 G2 c(2).        从培养箱中取出生长5~6天的hESCs，弃去旧液，PBS洗两遍，加入含7.5%蔗糖的1%多聚甲醛室温下固定30 min。
% R1 q" g; H+ Q) Q8 t(3).        AKP缓冲液洗涤3次×10 min。
, |: U9 w. Q5 e4 k(4).        配制新鲜的AKP染液：分别取45 μl NBT（nitroblue tetrazolium）染液和35 μl BICP（5-bromo-4-chloro-3-indolyphophate toluidinium）染液溶于10 mL AKP缓冲液中。! l$ D; h6 Y1 W3 S# C  ~/ S
(5).        加入染液，室温避光作用约20 min，自来水显色，显微镜下观察。
7 A1 ^+ H3 q6 q& E

lianmudichui

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2 w; i* F  ?( X1 I
, `/ b/ ?; }6 Q% E! @' z: T你是用的试剂盒还是别的什么做的，详细步骤能告诉一下吗？谢谢

gact

回复 ouyangjuan 的帖子
! ~% x, v0 y8 E8 j" E. P, l% }- E% S. ]+ b
显色液成分是什么？？？
* E( [6 O  G; _& o

gact

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. Z6 h5 }8 T2 u/ t' ?+ c) J/ d: e. h  `
收集细胞是指用爬片做，还是要胰酶消化离心收集？

zsc78

回复 lianmudichui 的帖子3 j. K8 B& q, s, u+ b
5 x: l/ H) e# S& H
Millipore的ALP试剂盒

dongxin

1. 按Vector blue Alkalin Phosphatase Substrate Kit III 配置反应液；
! P4 \( e0 {" G: u2. 用PBS洗细胞2-3次；8 x1 n" g9 _' M4 F/ }
3. 将反应液加入培养皿中， 37°C 避光反应0.5-2h；; V- w, r( L  r2 A& j* ~: s! X
4. 弃去反应液，用 100 mM Tris-HCl, pH 8.2 洗一次；
& J6 G" r' R/ m& i$ S' g- W5. 加入PBS，在倒置显微镜下观察。
- Y) W4 h7 Q6 w5 @5 H: ]' F供参考，祝好运！6 ^/ F  t7 Z" y' ?7 I) W! Q