|
  
- 积分
- 8
- 威望
- 8
- 包包
- 898
|
作者：应方微，黄丽娜，赖铭莹，王丽纯，何静作者单位：（518001）中国广东省深圳市眼科医院
: b( P; m& s# f! F% U) A" j
1 H- C5 k" d3 _0 M: s Y, K' Q+ L ! E8 s- z8 G0 ?! O& i7 m
) m5 T2 {, C1 W! f( u- t# l l
C2 J! z2 {8 A: _ m6 _
3 z( V8 R. Z6 {) g: G8 ^- ?8 ?8 N" b) O- w
! [( s& Q7 `! Z S! z8 q7 l $ s! H) y- L! P- s# V2 W
2 s x" `: F* X# K* | 5 g; D# @, I- @" w2 b
: ^/ R: R% R! x' H
+ Q- N) }1 e" e8 u% r8 ^ 【摘要】 目的：了解自体骨髓干细胞促进兔角膜苯酚烧伤后愈合的作用。
& s5 p: o& G& g9 c9 L" U; L3 v. U! m9 u9 }# U* p
方法：将10只家兔双眼角膜用300g/L的苯酚棉签烧伤后，随机一眼用自体骨髓干细胞滴眼,另一眼为对照眼，用无细胞的培养液滴眼,观察双侧角膜愈合时间，进行的统计学的配对分析t检验。结果：在自体骨髓干细胞滴眼的干预下，角膜烧伤的愈合时间平均为3.2d，对照眼的愈合时间平均为7.2d，根据统计学检验，两者具有显著性差异(P# ?4 p: R1 @: r* P0 q9 s6 b! b0 k
【关键词】骨髓干细胞；角膜；化学伤；兔1 C) v) ~2 s- Q+ g, n5 P: m% D
Research of autologous bone marrow stem cell treating the cornea burn with C6H5OH phenol
+ I" D7 c( ~# d/ h
6 w; [' z$ ^6 d# O- X; X FangWei Ying, LiNa Huang, MingYing Lai, LiChun Wang, Jing He
2 `( e8 ^# U7 c
: @ k# X" J6 F6 {6 I& T1 D- J* ` Foundation items: Medical Science Research Foundation of Guangdong Province, China (No. A2006591); Doctor Starting Project of Natural Science Foundation of Guangdong Province, China (No. 6300824)
* d$ i+ H* }9 |0 P" D. j
/ |$ P3 A* |8 I' l& ? U. J Department of Ophthalmology, Shenzhen Eye Hospital, Shenzhen 518001, Guangdong Province, China
. O) X. A1 d! N. A5 Y& x$ g9 V
* r+ t' U+ M9 I8 Y: @ Correspondence to: LiNa Huang. Department of Ophthalmology, Shenzhen Eye Hospital, Shenzhen 518001, Guangdong Province, China. yingfangwei@yahoo.com.cn0 T3 P2 m; i: W. I. A- L6 \
( _3 O; B( [3 M; s AbstractAIM: To understand the effect of autologous bone marrow stem cell in treating the cornea burn with C6H5OH phenol. 4 w/ `4 C/ c- D. K+ G* m
4 C% Z3 k# {+ F4 e& n5 p
METHODS: After burned both of corneas of the 10 rabbits by 300g/L C6H5OH phenol, one of corneas was trickled of autologous bone marrow stem cells, the other trickled with acellular culture solution was as control group. The restoration time was calculated, and the results were statistically analyzed by paired ttest. RESULTS: With the autologous bone marrow stem cell treating, the restoration time of phenol burning eye was decreased significantly (mean 3.2 days), compared with 7.2 days in control group (P( d+ F( d3 P$ ^2 ]& d6 I
+ r1 S; f p4 B" X# g) X# p& j5 v. ]" C9 s) R' p6 r
1 _: P3 M7 F# O4 D8 [ K. Z
KEYWORDS: bone marrow stem cell; cornea; chemical injury; rabbit- D0 g5 g3 D3 @+ ^
* p. g; w8 |$ |& ~/ ^ 0引言
. e% T5 J6 h! |7 B
" k* q3 d: X% r. M! r随着工业化进程的不断发展，角膜化学性烧伤在临床上越来越常见，角膜化学性烧伤经常导致角膜上皮愈合不良，进而引起感染，甚至溃疡穿孔、眼内炎等并发症，这已经成为近年来角膜性失明的重要原因之一。本研究通过兔自体骨髓干细胞的干预，了解其对角膜的苯酚烧伤愈合的促进作用，希望能为化学性角膜烧伤的治疗开辟新的途径。
. T+ \! h: D P2 S
# A; h* G- x4 Z6 s/ J+ D6 u: p5 T9 g 1材料和方法
( z8 t- D- |; }- \2 u+ j( x' x0 n5 {/ o0 s0 {1 m
1.1材料/ o" P- a6 G7 y
7 c. S' F/ L: ^6 @/ ^6 W
家兔10只（广东省动物中心），体质量2~2.5kg，苯酚，前段照相系统，10g/L荧光素钠（广州白云山明兴制药），淋巴细胞分离液(Ficoll)1.077g/mL，(天津),LDMEM培养基(ARP公司)，胎牛血清（杭州四季青）等。3 _2 `! n' ~# b K* \) {
$ C A/ I5 s# L2 z: Z 1.2方法
0 x, x) I+ a! D1 \, A$ w/ d' J% A3 ^2 z1 v% J/ c L$ }( J' O
1.2.1制作苯酚烧伤角膜模型& F" U9 P3 R2 x* g. `# |. T
R3 i3 P) A2 \7 o
用30g/L戊巴比妥钠溶液静脉麻醉家兔，1mL/kg，用地卡因表面麻醉角膜，将浸透300g/L新鲜配制的苯酚溶液的棉签按压在兔双侧角膜中央区域5s，形成直径5mm的化学烧伤区。
' G" g5 ~; d% {# T% `1 u0 m& Y
: D7 |( O" ?4 J( R 1.2.2收集骨髓干细胞[1]1 U+ {/ k# B2 s6 Y! c: i
' ` X/ _4 L: f8 r& Z# H& { 用16号骨髓穿刺针在家兔的胫骨上段内侧面抽取骨髓3mL，肝素抗凝，置于等体积的Ficoll分离液上，2000r/min离心20min后，吸取上方分离液，加入DHank’s液混合，1500r/min离心10min后，倒出上清液，再加入DHank’s液混合，1500r/min离心10min后，去除上清液后，用含150mL/L胎牛血清的LDMEM完全培养液重悬细胞，调整细胞的浓度为2106/mL，置于24孔板，在37℃，50mL/L CO2培养箱中培养。培养24h起每日收集悬浮的细胞，1500r/min离心10min后，去除上清液，加入完全培养液，调整细胞浓度至2106/mL，用于滴眼。
: x v5 `- o9 u* q5 o6 ]/ U, h" c5 j* o2 X. a/ t3 c% E
1.2.3自体骨髓干细胞干预+ H; ~5 p6 H+ Q( I! A
" q& H {4 i4 ~* N) K0 a: J
随机选取10只家兔的一眼作为实验眼，另一眼则为对照眼。在烧伤后24h起，用新鲜收集的的骨髓干细胞悬液2滴滴于实验眼角膜表面，1次/d,对照眼则用无细胞的培养液滴眼，直至角膜愈合。裂隙灯下，结膜囊滴10g/L荧光素钠，每日观察双侧烧伤角膜的愈合情况，角膜荧光素染色情况，记录烧伤角膜愈合的时间（表1）。- r* i8 K* B0 a4 r4 o
" B1 o; d6 Y; e9 h+ s; w
3 i7 [, b* \2 x" c, h' y h
+ ?# ^" [/ c' o L) j) g 统计学处理：SPSS 13.11统计软件行配对统计检验表明，实验眼角膜愈合的时间与对照眼愈合时间相比具有显著性差异（S=0.2，t=18.9，P＜0.01），实验眼的愈合时间明显比对照眼缩短了。
2 y' z3 q; [; n4 H6 A, L1 j6 N: S0 l2 u
2结果
% J+ Z# ?6 E2 f3 J2 a; c. A6 P& R9 d3 w. _* A- L
家兔角膜在300g/L的苯酚的作用下形成了角膜表面烧伤，角膜烧伤区域当时呈现乳白色，24h后裂隙灯下观察：角膜上皮脱失，形成溃疡面，荧光素明显着染（图1）。双侧角膜滴眼后每日在裂隙灯下观察角膜缺损情况发现：8只兔的实验眼角膜在滴眼后3d均完全愈合（图2A），2只兔的实验眼角膜在滴眼后4d完全愈合，此时全部的对照眼则仍有明显的上皮缺损，荧光素着染，但范围明显缩小（图2B）。滴眼后8d，10只兔对照眼角膜均完全愈合。实验眼在滴眼后平均3.2d角膜愈合，对照眼在滴眼后平均7.2d角膜愈合(表1)。表1滴眼后实验眼与对照眼角膜愈合时间表（略）9 z& B$ K/ ^6 K4 j( \8 Q, G
1 g' ?, k/ x- L5 a# q7 J
3讨论& f- f) o( s( I9 H6 E2 g! `) H
- ]. m$ b# j0 I7 [- e2 m苯酚属酚类，又称石炭酸，是细胞原浆毒物，低浓度能使蛋白质变性，高浓度能使蛋白质沉淀，故对各种细胞有直接损害，对皮肤、粘膜有强腐蚀作用，并能经无损伤皮肤和粘膜吸收。本研究中，角膜被苯酚烧伤后，呈现乳白色，但是24h后，上皮细胞脱失，可见水泡形成，但未伤害到基质层，属于中度烧伤，角膜烧伤愈合后，角膜无荧光素着染，全透明。本实验的重点在于应用骨髓干细胞在眼表滴眼这一简单的途径来研究其对苯酚烧伤的角膜上皮的愈合的促进作用。- q% e) a, w! f4 T2 u4 u2 @! X! ?
7 a" d) j {$ s( i
p* ^" u9 i' E: z: W- L9 D( F h+ M
角膜化学伤在临床上很常见，伤后角膜上皮修复过程中容易出现感染，或者反复不愈，裂隙灯下可见点状的荧光素染色。酸烧伤可使角膜组织蛋白凝固变性，亦可引起血管新生，眼内组织的炎症反应及瘢痕形成[2]。角膜化学伤后的急性期反应表现为多形核白细胞浸润为主的炎症，然后细胞释放胶原酶造成角膜基质组织溶解，形成角膜溃疡甚至穿孔。目前临床上除常规的抗感染等治疗外，对于羊膜移植及角膜干细胞移植的治疗研究很多，但对于骨髓干细胞的治疗，尤其是仅仅用眼表滴眼这一简单的方法治疗角膜化学伤的研究还是空白。干细胞是一类未分化的具有自我更新能力的多潜能细胞,在一定条件下可以分化成为机体内多种类型的组织和器官,以实现机体内部构建和自我修复。根据细胞来源的不同分为神经干细胞、血液干细胞、骨髓间充质干细胞等[3]。骨髓干细胞因为取材方便，易于体外培养扩增，不易引起免疫排斥反应，不存在伦理学争议，有可能修复损伤组织等优点越来越受到人们的关注[4]。在实验中，我们应用骨髓干细胞滴眼就可以有效的促进化学性烧伤的角膜上皮的愈合，从而减少了角膜化学伤后出现感染等并发症的可能，这对于角膜化学伤的治疗来说是开辟了一个新的道路。但是目前我们的研究还仅仅停留在治疗动物轻中度角膜化学伤的临床有效性层面上，在未来我们将继续这一方面的研究，对治疗原理及有效成分做进一步的了解，为最终实现将自体骨髓干细胞治疗角膜化学伤应用于临床继续努力。
# v* l8 ]8 x7 | 【参考文献】
% h" a) R3 }4 ]1 A8 R$ t- @ 1刘丹平，胡蕴玉，施新猷,等.穿刺抽取兔骨髓的方法.第四军医大学学报2000;21(6):741744
+ ~) T2 o/ C, l. G2 R, k, Y" E: i) i. M
. h9 m: g4 v* }/ W. u2 x% v% a
7 I1 ?+ @' ~$ w; ]& l2 j/ s
2孙为荣.眼科病理学.北京:人民卫生出版社1998:1562 i# \! y l+ q) N" n8 T |' c
J; D( g3 @3 c1 _5 Z0 O; ]
8 P: q4 z7 ]$ C3 D- ]9 P
' y1 a& u% U L/ w( R( M8 o2 |
3姜廷帅,蔡莉,惠延年,等.大鼠骨髓间充质干细胞体外可诱导分化角膜上皮细胞.国际眼科杂志2007;7(2):339341/ S$ k @3 H' X- Z# S
2 ?2 H5 k+ H& M( o# ^
) ^9 P1 u' a; N/ q% W" m
- h% ^7 h% E) K& s$ m
4孙占峰,王海涛,姜维良. SDF1与自体骨髓干细胞治疗缺血性疾病.医学综述2006;12(14):833835 |
|
发表于 2009-3-3 12:24
发表于 2015-5-24 09:58
