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本帖最后由 Temin 于 2010-11-27 11:49 编辑
: [2 s ^4 e4 P+ I& f有很多有经验的老师喜欢把细胞冻存管放在异丙醇中冻存,利用异丙醇的自身梯度降温的特性也能达到很好的效果 ...
3 {$ u' x, A/ \( c0 h古雅森林 发表于 2010-11-10 19:46 * s/ _+ P1 U/ x, B
一种方法是把水浴锅跳到39度~40度,晃动快速解冻冻存的细胞,注意冰块消失后立即拿出水浴锅,用酒精棉擦一擦,然后把细胞从冻存管里吸出,加到到已加好10ML预热Medium的15ML离心管中,颠倒混一混,然后台式离心机离心1000rpm,5min。弃含DMSO的上清,细胞沉淀用新鲜Medium重悬,在Dish里面培养。
; ?+ o) L- S$ Z7 G& _" D这是通常的去除DMSO方法,但是一般细胞状态好的话,DMSO不会造成什么影响,有人觉得离心会对细胞造成损伤,所以在细胞解冻后,直接加到Dish里面培养,不离心去除DMSO,待4-8小时(或者培养过夜)细胞贴壁后更换Medium即可。
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对于冻存细胞,我还是觉得有条件的话,使用细胞冻存盒,注意每5次更换异丙醇,这样每次冻存细胞的条件一致。而且,这样冻存条件能保证高达95%-98%以上的细胞存活率。 |
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