培养大鼠MSC有一个多月了，遇到些问题，希望高手能帮着看看（附图）

ambassador

我是新手，想请问一下怎么分辨哪些是干细胞，哪些是分化细胞~) A3 x) Q3 b; Z+ [5 C* J4 H
zhoujieqian 发表于 2010-5-29 18:05

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+ X; E  ?/ ]7 s$ w9 f! P$ i: h7 f7 w/ w' j5 G1 y
    我说一点，就是看细胞的形态吧！间充质肝细胞什么形态，再比较差异在哪里？楼下补充！

君子兰

我养大鼠的脂肪干细胞，也遇到和楼主一样的困惑，原代细胞都是梭形的，可是传代后细胞就慢慢变的胖了、扁了。我用的是进口的胎牛血清，低糖DMEM，用0.25%的胰酶加EDTA消化。不知道是什么原因。请高手指教！

554776562

看下培养箱  是不是培养箱的问题

illidancui

哎，我感觉最大的还是胰酶的问题。# d$ k0 E, \8 c) H6 }
调整下浓度，明天再做次原代看看结果。

exin11

应该是时间问题，24h有些短。  再就是不同的倒置显微镜效果真的差很多，很多精子在时间长后，会出现视觉误差，立体感也不好！～～我做细胞的，曾在两个实验室照过，差好多。  尤其是荧光染色/包病毒时～～～

illidancui

楼上是说首次换洗时间太短了么？有文献里说是三天再换的，不过我做的密度挺大的（一只老鼠做2瓶），这样会不会杂细胞太多三天有点久了。ls认为我一只老鼠4瓶然后三天换液如何？还望见教。

茶水

建议密度梯度后取细胞培养，细胞相对纯度好点。更好的方法是分选再培养。. Q0 e8 O5 u% ]4 u- i, x- O9 J
关于细胞形态问题，MSC应该有两种形态，一种长梭形，这个比较典型，类似纤维细胞，一为扁平，宽大型，有人说老化，成熟态，有人认为是接种密度低，细胞展开导致。" {9 E4 k/ E. K' t. ^6 w
我个人认为，因为采用原代培养，无法控制细胞纯度，因此，形态问题不要过于纠结。看看文献，无论是NATURE还是STEM CELL上的，细胞形态也是多样的( k9 n& D- b2 \
MSC鉴定，还是靠流式分子和诱导分化作为标准。
8 F2 N  y4 {* O. O* L/ ^如果有可能，下次抽空总结下：）

nhzxcsc

是不是有支原体的污染，你可以做一个33258染色查一下支原体，有点像的。

rzdongdong1986

很明显是细胞老化了，特别是第三代老化明显，我们养MSC必须加倍小心，要考虑到每一个可能伤害它的细节，我试验室最近养MSC也状态不好，出现老化，原因也没找到，以上有人说换进口胎牛血清，我们实验室用的都是进口的，可效果也不佳，我们在继续寻找原因吧，很头疼呢

Robert-A

倒置显微镜都是一样的原理，关键是你自己要会调整聚焦和相差环，同样型号显微镜不同的人拍出的效果千差万别