小鼠BMSC原代培养经验交流贴~~

tanhehe1006

回复 10# china1983chen
' L* m$ u- e. Z+ k8 q* D! b1 K+ [$ r0 M. t0 B. a6 Z( m

4 v( O1 ?4 E) z# M# e* W    是原代，是p1的照片

tanhehe1006

回复 9# jisuyun
: q2 E: B- |' {) H+ g
% L  y& b6 ?$ H9 O; x5 }" b$ P* f2 y' {' s# @# j
    你提的这个问题很好，但是形态是不能说明问题的对吧。我完全复制我上边发的一片用骨片养的方法，你看看这篇文章吧

china1983chen

* f+ i% D$ u6 \6 l9 O8 u9 s
% g- ?$ U2 `# ?; U; c4 u* s回复 9# jisuyun
& ^! y7 i8 I, G; |( v1 o
' M5 J7 O9 O7 o, r( d1 i
# P: J3 A" u8 f. u    这个就是MSC把，成纤维细胞不是这个样子的

烂桃

回复 7# tanhehe1006
+ {; L! I: q1 }$ i* P* k# `9 P
! R& ], C6 a9 W0 I5 C" e3 o5 {3 \' T% t/ |9 N
    这是原代吗，好像不是很有活力

烂桃

回复 1# angel-sakura . y- Z3 b* v: M4 \$ O7 H3 s( M

, [/ H8 a$ C( ]# c! l( j) Y% n0 {7 Y* l" j3 c: S$ y
    一般取股骨吧，在细胞室外剔除肌肉，泡酒精几分钟，剪断两段冲出骨髓，可以离心也可以不离心，我做的一般是离心后重悬接种，培养液用α-MEM或DMEM\F-12都可以，我个人感觉DMEM\F-12好一些，原代可以用15%FBS，传代10%就可以了，我一直在做不同动物的BMSC，形态都不错

jisuyun

回复 12# tanhehe1006
1 F6 j# w: q% t; X# N
$ ]- g0 X0 {1 H
% q) q4 b: Y7 b. o/ g    我是新手，刚做实验。昨晚下了你那两篇文章，刚才看了一下中国的那篇密质骨培养的方法，也想尝试一下。不过胶原酶还没买。我的血清也是GIBCO南美血清，并不是他说的专用于MSC培养的血清，培养基是L-DMEM。你用的血清、培养基是什么？% z+ o& i- V8 `2 u" m
问个问题：37度孵箱200rpm摇2h是怎么弄的？是摇床吗？200rpm怎么定的？

jisuyun

tanhehe1006 版主你qq多少？我们交流一下。

kqyy

1mL注射器太小,伤细胞

jisuyun

如果按那个IRAN人写的protocol，8h就换1.5ml液，一直到72h，会不会因为老是去动它而不好？有没有人用这个方法养的？

angel-sakura

回复 18# kqyy 9 W) l* J& h- I8 f# }% O/ W; |
请问你是用多大的注射器？小鼠的骨头很小，我觉得1ml注射器能刚好冲骨髓，不知道大的注射器能不能冲？