肿瘤干细胞真的好做吗

李夏

回复 饶冠华 的帖子
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) Z1 B* t# V5 _0 m% B您好，可以看出您一定是肿瘤干细胞中的高手了，所以想请问我目前如果想做筛选肿瘤干细胞的抑制剂小分子的实验，首先困扰我的就是肿瘤干细胞的来源。请问我用买来的乳腺癌细胞系用悬浮培养法得到肿瘤干细胞，然后来筛选药物，这么做可行么？或者说这么做有意义吗

饶冠华

回复 李夏 的帖子0 B. E# B! i+ x1 M7 N# T( A5 Y

0 v8 w  M4 A6 S% A# m0 F细胞系的也可以，但尽量参考那些有报道过的细胞系，体系很重要！另外，如果使用细胞系筛选出来的药一定要用原代的肿瘤干细胞去验证。另外最好想想能不能做动物实验

李夏

回复 饶冠华 的帖子) r) }/ \) y# o
8 [4 ]6 ?' E; e+ @0 q4 g
谢谢你的回答，收益了

程迪0711029

菜鸟学习中！

hanyl

没有那样的经验，哪能保证出结果。跟着这样的老板真是倒霉，估计这个老板的成就不会太高吧。舍不得孩子，套不住狼，既然想在这一方面发展，干嘛又这么小气？

neohunter

8 d! I9 E6 ]* n9 k5 H! K$ \; o. ?1 C( \5 E. e( h
回复 hany2007 的帖子
: X( r7 t3 X4 e: e, b" ^! G
' a8 `/ W  w/ r4 q6 M9 _今天刚好路过，看见这个帖子，尽管是两年前的帖子了，花点时间针对帖子中迷惑中的地方回复下吧，希望对在做或者将要做肿瘤干细胞的同学有所帮助：
7 U- b  V5 ~- ~) G1、CSC是否存在这个话题真的是太大，太多的文献，太多的争议，不是三言两句就能说清楚，但主流的声音是偏向于CSC存在的。先不说CSC是否存在，可以肯定的告诉你的是，细胞中存在很多亚群，一些亚群具有更强的抗化疗和放疗的能力，这部分细胞肯定是存在的。
- m2 w3 b5 c. _4 u' R9 `2、你老板的意见是用化疗药物来富集，这方法可行，但是你要注意，药物一定要选对。不是所有的化疗药物都可以有效的富集干细胞；0 S1 f& K, B& q) t% u+ T
3、真菌污染并不容易发生，但是很容易发现，其实也很好杜绝，按标准程序清理培养箱，更换滤器，我曾在很多研究生做实验的细胞培养室做过实验，初进实验室的菜鸟研究生一拨拨的，培养室随意进出，无隔离，不用换鞋，但是我的细胞很少出现污染，原因在哪里？我这里没时间展开说，有时间再说吧。
- e* f3 p" H$ _  f. }! E" X4、利用医用X光制备免疫缺陷老鼠我个人认为并不可取，有这功夫还不如去工地搬砖自己挣钱买好点的老鼠，说实话，即使买不起NODSCID，裸鼠也不算很贵吧，用射线照老鼠，本来就可以引起正常细胞突变导致肿瘤细胞发生，而且尽管你照射的剂量是统一的，但是可能因为老鼠的个体差异，很难保证是否达到了免疫缺陷的标准，这会给你的后续试验增添了很多不确定因素；! ?3 l" _! b! ?  L; m7 }: T% `% t! z
5、不熟悉肿瘤干细胞方法和理论的PI，实话实话，还真不少。。。我以前呆过的公共实验室的PI的研究方向之一就是肿瘤干细胞，但是他对CSC的了解让我蛋碎了一地。。。。让我恼火的是，他们下面的技术员很不厚道，发现我做肿瘤干细胞后，经常不经过我的同意观察我的细胞，偷看我的科研记录本，翻我的抽屉和订的各种试剂，从而学会了一系列的方法技术，也许有人觉得得我过于吝啬，但是我想说的是，一个小的实验条件或者细节，我可能需要花费半年甚至更长的时间才能摸索清楚，但是教给别人，只需要几分钟就够了，更何况他们向我收实验室设备费和场地使用费的时候，就跟宰猪一样下手太狠。' j( O$ v( Z4 e0 d% B# R8 j5 Q2 n
6、此外，从你的帖子可以看出，你的理论水平尚未达到一定的高度，要做一个课题，如果没有好的PI指导，完全靠自己，做出好的paper，也不是不可能，前提是你自己对这一领域已经非常了解，那么，如何提高自己，我的建议是不停的看文献，建议多看10分以上杂志的，就算是为了入门看的杂志，也不要低于stem cell 和cancer research，至少要高于5分的。5分以下杂志里的文章，即使是SCI，也是人云亦云，很多水文甚至造假的，根本不值得浪费时间。博士期间精度文献最好能超过3-500篇，泛读最好能达到1000篇左右。同时也不要过于迷信高分文章，一些十分以上的文章，都存在造假的行为，尤其是与临床结合做转化医学的，本人就见过这些所谓的PI造假无极限。为什么在中国会造成这么急功近利，造假频出、人心浮躁的科研局面？很大的原因就是因为高分的SCI意味着金钱、名誉与位置。; o  x9 U3 j; v3 h* s
7、此外，肿瘤干细胞研究是很烧钱的。我的钱主要花在抗体（总共用了100多个抗体），流式上机费（40元/管，上了几千管），生物芯片（10万左右），动物实验（需要大量的动物长时间观察，NODSCID近300元一只，加上每天的饲料费，各种名目的仪器使用费）。这三部分，是最基本的烧钱的地方，如果你的文章想拓展，那么还要做相关通路，做某个标志的过表达和敲除，那么构建病毒载体还需要花上一笔，此外其它的常规实验如免疫组化，PCR，western等累计起来也不容小视。加上细胞培养各种培养基血清耗材，花费巨大，如果你的PI不想花钱又想出结果，那么你只有造假一条路可以走。
5 Y. I% t: ~! C8、除了上面说的几点，还需要两点，一是运气（marker的发现，需要点运气）。二是时间（我做某种肿瘤做了5年，现在才算有了点眉目）。( c/ v/ @2 z0 ~/ U
以上是我针对你帖子的一些匆匆的回复，没有组织语言，随意写了写，可能有些狂妄自大的地方，但是都是我的心得，哪怕招致骂声一片，还是愿能起到抛砖引玉的作用。

ccnuld

刚开始做的时候确实挺困难，特别是在实验室零基础之上。而且在最初不能确保出结果的时候，要说服老板投入资金，确实压力蛮大的。但万事开头难，只要能禁得起折腾，比如在细胞分选及荷瘤方面，自己能够坚持住，后面的路就会稍微好走一些，也算是给自己加油咯！

青云之上

       肿瘤干细胞众说纷纭，我们实验室也做，主要做乳腺肿瘤干细胞和肺癌干细胞，用流式鉴定和分选，乳腺用cd24和cd44标记，肺癌一直弄不好，现在有个博士师兄在做，主要以aldh进行标记培养，乳腺之前是个研究生在培养，她是贴壁培养，虽然流式检测跟文献报道一直，但是也有认为很有问题，我用悬浮培养原代很多克隆球，但是一传代就很快没了，增殖很少，肺癌的更伤心，所以，我们都在路上，希望你能好运。不过，还是要跟导师搞好关系，商量着来，能先做些东西，一步步来，要不真的难度很大，压力就更不用说，后到什么时候没谱啊。
5 F' p$ W/ L( |; u       说到真菌污染那个，想起来读研时一老师跟我们说，他们当时有次实验室培养箱真菌污染，各种办法不能解决，酒精、新洁尔灭、高锰酸钾熏等全完败，最后，在导师不知情的情况下一把火烧死了所有真菌，呵呵~~~~~

Musing

我也是处于实验初期，老板想做白血病的干细胞，一直没有头绪~

jingjing

恕我直言，都博后了还选择这种条件的实验室，瞎折腾。
8 a; T3 M8 N) ~4 T2 h
( b% G, ^, D9 R6 h' S, ~2 z肿瘤干细胞原代不好做，即使获取后，培养条件不精确的话，体外也很容易分化，鉴于楼主现在的状况，我觉得困难重重。话又说回来，不困难体现不出来博后的价值，坚持吧。