关于NK培养的问题

a1025002950

分离外周血得到PBMC来培养NK时，我把分离出来的血浆放在65度水浴半个小时，才发现温度不对，结果离心后的血浆呈果冻状，本来不想用这血清， 但是公司规定不能用胎牛血清，担心细胞又长不好，我就冒险加了一点 ，加完之后我就后悔了，细胞被那一团一团的东西包裹悬浮，不能与包被过的瓶底接触，这会不会严重影响细胞的增殖分化？有没有挽救的方法？  这都是粗心惹的祸， 请朋友们能提点建议，尽可能把影响降到最小

淘知路遥

水浴锅每次用完都要调至本实验室需要使用的最低温度，一般是调至37℃，每次使用前再调至所需温度。65度温度太高了，里面的蛋白质变性了，在整个培养过程中没有血清或血清异常会影响细胞总体增殖，分离出的细胞不会完全被包裹悬浮，剩下的还是和正常一样。培养几天团块会消失的，若不行可以拿移液管吸出来。

a1025002950

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4 B& e. m( ?+ u; o2 s6 e+ Q  t我们灭活的温度本来是56度的，现在我不能过滤也不能吸出那团块，会带出那细胞的，
* P' F9 ^( I4 x5 I: B- c1 e0 D% y1 p6 V

a1025002950

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培养瓶底部有因子包被，细胞被包裹悬浮，不能接触到底部的包被因子，肯定会影响细胞的增殖分化

淘知路遥

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- g# S* u7 ?, d2 i' ~( E, z过几天等细胞长起来了，那团块还在的化再处理

a1025002950

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+ z$ ~1 l0 H# g8 D/ p# S, M细胞能长起来吗？
  o5 C2 c; L, I8 G* f

淘知路遥

回复 a1025002950 的帖子7 ?, t% `* }6 P0 M4 y8 F0 @

* W& B% Q- P* f$ L: d团块吸附细胞数量是有限的，你镜下看还有瓶子里还有较多散在的细胞吧，这些细胞不受影响，只是数量少了

淘知路遥

回复 a1025002950 的帖子7 E: Y* L" l+ w
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细胞会长，不加任何血清就是增殖慢，有健康健康脐血浆可以加点

lihaifeng

这种血浆是个别现象。解救办法就是赶紧把细胞吹吹 ，换个瓶子，血浆再处理处理再加，血浆呈液态，透明才可以加。

ltickp

还是其它的胎牛血清或者血清替代物吧，不然你可能赶不上收细胞回输的时间了