关于血液加入到淋巴细胞分离液中的问题

wzs1985

回复 阿秀哥 的帖子
$ W$ I( p+ R7 ?" ^" t) |* H+ H( a) o: d, w
对的，  抱歉弄错了。
- D5 y/ c* ^1 I% _+ o. |或者1比1也行。

Mrhydra52613

回复 gsg040222 的帖子; G6 {! k! k) U' A

' a2 J  `0 v3 P! T  K1 Y& y效果怎么样？话说你们实验室离心速度一般用多少的，我看论坛里这方面的差别还挺大的

long3390hai

回复 gsg040222 的帖子3 v5 n( O, u) C0 b# z  k
* L9 I4 C) O% O; a' [
1、离心血液，去血浆，加等体积盐水稀释。/ R( J. l4 o' w9 p* C( M
2、混匀血液样品，在加好淋巴分离液的离心管（淋巴分离液：血液=1:1.5）中，沿管壁加入血液样品，先在管壁涂好一条通路，然后缓慢加入，保证液面不被冲破。+ I6 T) ~" Z$ G) B) l! j7 K
3、离心转速慢升慢降。6 I' ~' [& Q0 L7 t. f0 a$ w
4、离心之后，取其上清，在白膜层上方1cm，和下方1cm，全部取出。加盐水混匀，注意盐水和取出液体的比例大于2:1，这样有利于提取PBMC。

gsg040222

回复 long3390hai 的帖子! w- ?* r0 e& \" b/ `
' P& t/ U2 [6 Z) I
谢谢

gsg040222

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; q7 t; h; c6 ]( o; o
( }; h1 V- M* y+ q/ E6 s4 f效果还是挺好的，我之前离心的话用的是3000r，效果还是挺好的，但是还是想更好点

gsg040222

回复 Mrhydra52613 的帖子" G9 q" B- _6 U% _

3 _8 a& H/ g4 ~* Z' k* u" N恩恩  ，就是要这个，非常感谢您

jxsese

加分离液时候要小心加入，一定要加到管底，不要沿着管壁加，另外每一种分离液用量都不一样，我们的一般都是稀释血液2：分离液1的量来加的，加的时候一定要调小移液枪的打出速度，第一个10ml越慢越好，后期可以适量加快。

wjh四月

全血离心后去掉血浆，加生理盐水补到原来位置，混匀，混匀后的血与淋巴液1：1加入。离心。15ml离心管效果更好

gubingxia

1盐水充分稀释（比例大于1:1）
* o4 J8 q- w9 Y8 B+ T5 k; o2重悬混匀（不能有团块）
; M/ t2 e- H0 x: ?) T3血液与分离液比例1:1
2 w  v$ g) s- c( H4离心管倾斜45度左右，刚开始必须缓慢加液，先用吸管勾勒出缓冲通道，向上提一下，不能让血液直直的冲下去，冲力过大会冲破分界层，分界层建立后加液速度可逐渐加快，随着液面升高离心管慢慢直立起来，因为分离液有毒，要尽量减少与血液的接触时间，还要防止时间过长红细胞沉降
  w3 i7 z) H: _( J- z5离心升10降19,600G" i9 x& e( b2 ^4 }
6取送离心管的过程要小心翼翼，不能晃动，以免打乱分界层。
: C- x0 o6 }, y+ G7可以先把上层浅黄色的血清吸走，留约3mm左右，眼睛的视线要与分界层平行或者从下往上看，以便更好的观察分界层，用吸管紧挨液面缓慢转着圈吸白膜层，边吸边轻轻移动，直到肉眼看不到有白膜层，尽量少吸白膜层以下的液体' ^2 L% ^$ T; i9 ]7 p/ H7 B8 V
8加盐水洗涤充分，离心洗涤3次，第一次1800r,5min,第二次1600r,5min，第三次1400r,5min6 x/ g6 n, M: [
9培养
! r6 O+ d, U  L9 l! |我们就是这么提取的效果不错，希望对你有所帮助。离心力可能会因为离心机的品牌不同，参数也会不一样，这个要根据实际情况来调整。我们用的是四川曙光 的离心机

曦馨橙子

感觉稀释液可以多加点，混匀，不要有血块~