CAR-T细胞培养中慢病毒转染的问题

yanxm920

没有遇到过呢

木子小王令

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0 }* a  P8 l3 ^( D是的，感觉自己还是操作有问题。; G6 G: q9 B0 W% Z( I
是别人给的培养第九天的Tcell，我每孔取了3×105接的。因为以前慢病毒转染时候一般都是在转染时细胞汇合度达30~50%，所以这回转Tcell也想当然的沿用这个规律。3 e8 U8 q6 ]( b6 M0 p; U  O

2 b6 f: @: ^' Q3 x. f+ F请问你是在Tcell初始分离后就开始用抗体刺激吗？是不是这个时期的Tcell活力比较高呢？（我之前用的Tcell是不是有点老了？）3 L$ G/ j) s  C$ Y. T3 F2 Y) B
; m  \' A" F: t, L3 h; I" f6 t; C( Z
铺板密度如果是10^6/ml，6孔板铺1ml就可以的吧？接种第二天做转染，然后24h后再换液？7 |  B; D8 A# ~9 H

riverdtang

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* N& l- O) E) P6 x+ _4 b8 M是的，第九天转那效率肯定不会很高的，我们分离就刺激，浓度看你们所需的细胞种类和抗体质量了，这个需要摸索一下，不过你们可以长到第九天还有10%转染率，那刺激可能不是最大的问题，你可以试下分离2-3天转，可能会好些。悬浮细胞不需要铺板啊，直接转就是了，第二天换液。

木子小王令

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) E6 @* m3 Y+ ]  k4 z- w8 k% r% T' j. O8 _8 }' _$ ]
恩恩！谢谢大神！! F  p- C) T- O0 z3 R4 L
我下次试着做个梯度，有问题还请多多指教！！！

ET生物人

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$ r- x4 u. J& M" G3 s7 `, x8 y" p6 h9 |
你们是用什么培养液的？？怎么转染率这么高，我们感染效率一直都很不稳定。

六弦七品

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; |3 ?, G9 e  a& X6 {' }
; b& Q/ Z  Z# B3 w你们转染效率这么高，我们都用了RetroeNection加polybrene，还是没多少，应该是载体有问题，你们用的那种载体？

六弦七品

回复 winqi 的帖子9 ]" U7 [/ V+ q. d: G; O

- ?2 z, z6 ]9 J3 S4 Z. a用的CMV，最近准备换ef-1a

riverdtang

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# N" W, M- ?& g, [8 I( {" i4 l4 }# `: t. p
启动子试过没有什么明显的差别，还是转染时机影响吧，分离激活后尽早转会好些

jinhaifeng

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) Z6 l* j3 V3 R+ s) H7 |$ j- _
7 g* P8 `: x% R4 U. A- X% n请问你们用聚凝胺了吗

只因偶然

回复 riverdtang 的帖子5 b/ [, W" c: T3 y
! G1 e% a9 b& H/ k! p1 z
你们测转染率是什么时候测的？为什么我们养的CAR-T，转染第5天后（转染第2天换液），细胞增殖速度变慢，活性下降了呢