凋亡细胞检测方法

凋亡细胞特征：

凋亡蛋白的出现和增多（caspase 含半胱酰胺的天冬氨酸蛋白水解酶）；

线粒体跨膜电位下降；

DNA被胞内的核酸内切酶在其核小体之间随机降解；

细胞体积缩小、核固缩以及形成凋亡小体

1.形态学观察

凋亡细胞因核断裂形成二倍体；

2.DNA凝胶电泳法

凋亡细胞中晚期，DNA被核酸内切酶在核小体上随机降解，产生180-200bp倍数的DNA片段

3.TUWEL法

TdT dependent dUTP-biotin nick end labelling

     凋亡细胞中内源性核酸内切酶被激活，细胞自身的染色质DNA被切割，出现单链或双链缺口，并产生与DNA断点数目相同的3-OH末端，末端脱氧核酸转移酶（Terminal deoxynucleotidyl Transferase TdT ）能将脱氧核苷酸连接到DNA的3’末端。荧光素（fluorescein）或者生物素（biotin）标记脱氧核糖核苷酸，在TdT的作用下连接到凋亡细胞断裂的DNA3’-OH末端，用荧光显微镜即可观察结果。在此基础上连接辣根过氧化酶标记的荧光素抗体，即可进一步放大检测型号。

4.AnexinV-PI染色法

     AnnexinV是一种磷脂结合蛋白，在生理钙浓度下能与磷酯酰丝氨酸（PS）高亲和力特异性结合。PI（碘化丙啶）是一种能产生荧光的染料，不能透过完整的细胞膜，但能透过凋亡中晚期的细胞和死细胞的细胞膜