CIK细胞培养程序1. 将分离机采集细胞缓慢加在细胞分离液（1.077 g/ml）上，体积比为1:1，800g，室温离心20分钟；2. 收集界面的白色絮状细胞加入30ml的低糖DMEM培养基，轻轻吹打混匀，300g，室温离心10分钟；1 E; E8 K5 O* V) @3 @; b3. 重复离心洗涤共3遍；4. 收取细胞轻轻吹打混匀，加入无血清培养基及IFN-γ 500 U/ml置37℃、5% CO2 孵箱中培养；) a* C; r# b) y* I' o5. 24 h后加入IL-2 300 U/ml，CD3 10 ng/ml，IL-1 100 U/ml 继续培养，；3 R# m4 J* x j1 e6. 每天观察细胞生长状态并根据情况进行换液及加入IL-2 300 U/ml进行扩增；7. 细胞收集：第14-20天收集细胞，离心弃上清液，用生理盐水洗涤细胞2 次以上，重新混匀，悬于100～200 ml 输注用生理盐水中。
治疗方案制定
. e+ e5 X) b2 D0 E5 \6 Y
从理论上来说，几乎每一位肿瘤病人都可以从免疫治疗中获得益处。早期肿瘤病人由于机体免疫系统尚未受到肿瘤的严重影响，对免疫治疗的应答较好，疗效相对也会更好。CIK 细胞对多种实体肿瘤均有明显疗效，对白血病也有很好作用，尤其是骨髓移植或化疗缓解后能够清除残存的肿瘤细胞，防止复发。CIK 细胞治疗肿瘤的疗效除与输注细胞数量及活性有明显关系外，还与患者的选择有很大关系。
适应证
CIK 细胞可用于下述肿瘤患者的辅助治疗： ; o/ }: _ A2 z& ~& a- h
1）手术后患者，可防止肿瘤转移、复发；
2）无法进行手术、放疗、化疗的中晚期患者；# k( P+ L2 E d% @
3）放疗、化疗失败的患者；5 w: }8 K, ]. P, }+ F
4）放疗、化疗后、间期患者的综合治疗；
5）常规药物治疗无效的癌性胸、腹腔积液患者；: i! D+ v5 {5 _5 x' x
6）骨髓移植后或化疗缓解后的白血病患者；
病例选择" D x# X2 M5 @% f; D2 N, J
⑴患者预期生存>3 个月，生存质量评分（KPS）> 60%。
⑵重要生命器官功能正常，血胆红素 < 68 μmol/L，天冬氨酸氨基转移酶 < 90 IU/L，肌酐 < 353 μmol/L，白细胞计数 > 3.5×109/L，血小板计数 > 80×109/L，红细胞压积 > 0.20。& F2 R% t- P$ ]) t: F7 j
禁忌证
1) 不符合纳入标准；0 `8 s6 S5 Q9 ~4 {2 W
2) 合并心、肺、肝、肾等重要脏器的功能障碍；
3) 自身免疫性疾病的病人；
4) 凝血功能障碍如血友病，或凝血酶原活动度(PTA) < 50%，血小板（PLT）< 40×109/L；
5) 正在使用免疫抑制药物，或器官移植后长期使用免疫抑制剂的患者；免疫功能缺陷患者；
6)重创伤、手术、出血、自发性细菌性腹膜炎、急性感染发作期及伴有休克的患者；
7) 妊娠和哺乳期妇女；
8) 高度过敏体质或者有严重过敏史者；0 C* J7 E" h* I" H% e
9) 患有精神疾病者、酗酒、有药瘾或有其它不宜进行临床试验者。
中断治疗
在治疗期间出现明显的毒副作用；重要生命器官出现明显功能异常；患者因某种原因提出终止治疗。$ ` e
治疗途径& j: D$ L8 S( m/ B0 J
根据治疗途径可分为全身治疗和局部治疗。全身治疗是通过静脉输注进行；局部治疗是将收获的浓缩CIK 细胞直接注入病灶部位（胸、腹腔积液患者直接注入胸、腹腔内），也可通过介入方法。
治疗过程- c' @) k: B% E3 l3 q! F& n5 f5 x
1、首先用成份血分离机采集病人外周血单个核细胞，大约50～100毫升；或第1～3 天连续给患者注射IL-2，每天50 万U，第4 天采集患者自体外周血50～100 ml；8 ~* Y* E1 B$ Z7 B5 y
2、而后将采集到的细胞在超洁净实验室进行分离、诱导、扩增、激活等培养过程及质检；* z) ?3 R6 M- g1 m8 H7 ?
3、于培养的第15天左右收获并配制成回输液，间隔2-7天分5-8次回输细胞；2 T9 p$ U3 V3 O
4、观察治疗反应及疗效；间隔3～4个月可进行下一疗程的治疗。;
输注CIK 细胞数量
研究表明，当输注的CIK 细胞数达到一定数量时就可出现明显的治疗效果，其效果并不随着输注细胞增加而呈线性增大。要求：每次输注的细胞数应 > 1×109，每疗程输注细胞数应 > 8×109。输注的细胞中可视情况加入IL-2 100 万U。 |
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