留言板
- aulenuyah
- 是的，做过一段时间
yangpan521: 你好，请问你是不是做过转基因细胞？
- hyde
- 要看起始时细胞代数，一般加起来10代左右都可以的，传代的时候不要太稀（不知道你们用来做什么？做克隆动物在6，7代比较好），可以加bfgf+15%血清，这样细胞老化慢，可以多养两代。
yangpan521: 你好，请问电转后的细胞，晒出来的克隆，最多可以养多少代
- genedu
- 我没有做过羊的成纤维细胞筛选，但是道理都是一样的。首先你电转完毕之后，电转的细胞要按照梯度稀释法进行铺板子（10cm）,1:10,1:100,1:1000，在大概一周之后就会发现有单个的克隆出现，当然必须是克隆之间独立存在的，不要连成片。
yangpan521: 你好，请问你做过成纤维细胞电转吗？我现在在要做转基因细胞，用样的成纤维，电转后，却不认识克隆细胞，所以，你是否有相关图片可以参考呢
- hyde
- 我找了一下当时的照片，主要是电转第二天药杀组的荧光照（在6#），没有克隆后的图片。我们的显微镜在细胞房外面，10ml dish 不太好拿出去，所以没有拍过。形态很明显。祝成功
yangpan521: 你好，成纤维细胞电转后，长出的单克隆是圆形的吗?有图片可以参考一下吗
- hyde
- 图片不太找的到了，你不电转就直接铺成纤维细胞（计数一下确保细胞不长在一起），长出来的形态就是了（我们用10ml的dish铺，这样克隆不会连在一起），不用纠结形态，一般铺下去第二周就可以看到了。有些细胞状态好，会形成致密（一般成纤维细胞长满后的密集条纹状）的成纤维细胞细胞簇，一般是圆形的，这样的克隆以后比较容易扩增。有些克隆状态不太好，会显得稀稀疏疏，也基本上是圆形的吧，但是后面挑出来后不太好养。
yangpan521: 你好，成纤维细胞电转后，长出的单克隆是圆形的吗?有图片可以参考一下吗
- yingjie
- 中文版的手册没有，在这儿下载了几个英文版的关于：细胞治疗产品服务标准，还有AABB官网找到基本书，我是没怎么研究了，是我领导要，fact认证手册，不清楚是什么认证，我查查看
yangpan521: 你好，你求到美国血库AABB的认证手册了吗，还有你对fact认证手册有了解吗
.
- yangwy028
- 计数就是10ul就可以了啊。如果还觉得不够精确的话，可以把计数板的四个大格都数了，取平均值。
yangpan521: 想问你一下 ，小鼠人工输精时大约数多体积，我现在输精10ul升 可行 ，指导一下
- yangwy028
- 一般情况下小鼠正常的话都能够自己形成阴道栓的。人工的话就用6号注射针头，截去尖端斜口部分并打磨光滑，连接0.25毫升注射器做输精器，直接经阴道、子宫颈注入子宫结合部，小鼠的摆放方向可以由自己的习惯来选择。无需堵塞阴道
yangpan521: 想问问你所用的小鼠输精器是什么样的?还有在输精时是将小鼠四肢朝上进行的吗？
- inno
- 我目前在做猪的IPS，是猪耳成纤维，也是逆转录病毒体系，现在就是筛选不出来，感染效率什么的都还可以。不知道是培养体系还是铺板密度有问题？
yangpan521: 已经做过了 细胞是羊的皮肤成纤维细胞，逆转录病毒体系
- inno
- 你是做羊IPS的吗，请问一下用的是什么来源的细胞诱导的，用的什么体系？
- yangpan521
- 很简单，拿到组织后 ，就把他当做普通的组织块来培养就行了（这是老板这样吩咐的），但我个人认为畸胎和正常胎儿培养后肯定会有差别，就想后期如果诱导成IPS后，会不会有更大的差别还无差别，这都不好说，自己也正在思考中
- dongxin
- 您好，我在论坛上看到您是采用组织块培养法，药流畸形胎儿8月龄，做原代培养，因此想向您咨询一下对于药流畸形胎儿您是如何处理提取细胞的！具体一点的^^不知可否
yangpan521: 没有做人ES呀，只是正在做人的皮肤成纤维细胞，后期要诱导IPS细胞
- dongxin
- 您好，在讨论区看到您是做人ES的原代培养，想向您请教具体的操作步骤，不知可否！谢谢^^
- mckf111
- 你好 小弟这里急需293T细胞包被慢载系统 在网上听说贵处有 不知您身在何处 谢谢
- yangpan521
- 不好意思，我这没有
- yuangaoqian
- 你好！请问你那有FUW-M2rtTA载体吗？是否可以赠送？我们会在将来发表的文章里对您的慷慨馈赠表示感谢！现在实验很紧张，不想再通过Addgene公司要了，所以想看看国内有没有可以赠送。非常感谢！
