H9细胞转染后加药出现细胞成片死亡，像是没贴紧浮起来一样，请问是怎么回事啊

ailiszhang

求各位大神告知，谢谢啦

ailiszhang

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谢谢回答。; C5 k. }+ ]2 U& {
请问阴性对照是什么，有什么作用？药筛过程中还需要设其他对照吗？
) A; ~8 k8 _! W/ R  T- j. j" c我做的H9细胞，puromycin筛选，药物浓度最开始加的1ug/ml，死了很多，后来降到0.5ug/ml，第二天细胞就漂了一些，第三天全死了。按照实验室师姐摸索的浓度来加，细胞基本没怎么死。

ailiszhang

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1 w- w8 x- B; ]8 b, z. O7 Q" C* a3 @7 k8 U1 t  p1 W+ q" z0 V3 O
我用的载体中没有GFP，只有PURO抗性基因，做的电转，想得到稳转细胞系。
% e: D) P3 m/ R+ A( \, E& q! s8 e我还是不太明白，阴性对照就是没有做转染的正常hES吗？还有阳性对照怎么做呀？克隆大一点具体怎么来判断呢，看直径还是细胞数目呀？你们一般转染后多久加药呢？加药后是每天全换含puro的培养基吗？什么时候停止加药呢？  
- }  g# a" s6 P8 v! ]另外，如果有这方面的文献，可不可以分享一下呢？+ I+ R; M  z+ u+ t1 m
问题有点多，可能问得也比较白痴，还请不吝赐教，谢谢！

ailiszhang

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这两天克隆中间出现黄黄的东西，而且边缘爬出梭形样细胞，是不是分化了呀？每次加药后的第二天细胞就会死很多，之前我会停止加药几天，这次没停药，继续加了，不知道明天细胞会不会一个不剩，目前的状态看起来不乐观，好心塞。