H9细胞转染后加药出现细胞成片死亡，像是没贴紧浮起来一样，请问是怎么回事啊

hyde

药杀阴性对照是什么样子的，如果对照死的一样多说明转染的效果不好吧

hyde

药杀浓度是否摸索过，什么药物，什么浓度，hes每个细胞系对药物敏感性还是有所差异的，要事先测试一下，浓度太高会死的比较多。

hyde

; n% P+ E  w9 ]) n
2 j1 }+ N) p! T) B' \1 s回复 ailiszhang 的帖子+ a) i. |! q- q
6 P' L5 q2 v$ q1 P& |
阴性对照就是药杀对照，瞬转质粒停留的时间比较短，不能杀太久，对照死完了就停药。我也差不多用0.5的puro，转染的质粒带gfp标记吗，或者做个阳性对照看看转染效率吧。另外，药杀前先将克隆养大一点再杀。

hyde

稳转？用病毒不是比较容易嘛。稳转就等克隆长大，但没有长在一起的时候，长在一起之后不容易杀，而且孔板的边缘也不容易杀，传代后再杀几次（我一般传几代接着杀杀，保证细胞系的纯度）。阴性对照最好找个带gfp，没有抗性的质粒，这样可以先看看电转的效果，这些细胞也不抗药，杀完为止。不一定每天换液，看细胞多不多，非常少的话我会隔天换的。