关于脐带间充质培养的问题

hwlightning

最近处理了一份15cm长脐带，剔除羊膜、静动脉后，用眼科剪剪成很小很小一块，用组织块贴壁法做了10皿，培养箱倒置了2个小时后，加入3ml培养液。期间一直没管，第三天观察，组织块变得很肿大，而且有的已经飘起来了，不管了，添加5ml培养液，再过3天，组织块飘了一大半，也没看见细胞爬出来。又过了3天，把飘起来的组织和培养液都去掉，重新加入10ml培养液，到现在12天了，都还没看见细胞爬出来，各位帮我看看是哪里出了问题了？？？？
* A2 p7 C$ ]7 j1 B我分析了下，一个是组织块没有贴壁贴牢，二是培养液的更换时间问题。
! r7 @( \  S8 l给位同仁帮我看看到底是什么问题？

小小龙001

我们一般做的时候都不倒置培养，主要是制备完成之后不要轻易去动或者摇晃，要给他们贴壁的机会，而且换液不要很频繁，尽量半量换液，在最大程度上减少环境改变对细胞的影响

20084720113

2个小时时间是不是有点儿短，你可以过夜（24h）静置试试，这样飘起来的组织块就会少很多；另外组织块不能剪太小，1-2mm3大小应该比较合适；你用的是9cm的皿吗，开始时3ml培养液是不是有点少，8-10ml应该比较合适；第一次换液可以等个5-7天在换液，一般在10天左右可以看到少量细胞，此时最好再次换液。12天还没有看到细胞也很正常，一般DMEM+FBS的培养基会比较慢一点，组织块飘的太多也会影响你的观察，剩下的组织块再耐心等待吧，说不定明天你就能看到惊喜。

hwlightning

回复 20084720113 的帖子
& r$ O7 t" I2 \( Z$ u: o% r! [+ U& o; w1 ?7 x
不加任何东西就24H静置？我是用的9cm的皿，应为是做临床我是用的商品化的培养基。

hwlightning

回复 小小龙001 的帖子" N6 w! g2 J" d! f5 V
* }2 _& |$ L) [, v$ Y. N( R
我制备完我都不会动，三天后才会拿出来看看。可就是贴不住

20084720113

回复 hwlightning 的帖子$ y& \3 W. r" d( \+ ~

3 g4 p4 q' G, k' O/ d里面会有少量的培养基，具体多少还真不好描述，一般刚好能重悬组织块就行了；我用的是瓶，透气性好，培养箱湿度大，放24h没什么问题的，皿的话不太清楚，你要是怕干了的话可以放8-12个小时试试，总觉的2h太短。

20084720113

回复 20084720113 的帖子
% o9 ?4 g# N5 J! @( D
* E) a' e, c5 O# I6 v* V贴的不牢的话，你加液很容易就起来了

deshenglll

回复 hwlightning 的帖子
, v# c) g. o* V. @5 E: e) Z& B1 y- Z) c# x5 X0 E" n$ F
不用倒置，直接加进去就行了。用倒置都落伍好几百年了。直接将组织加皿里，3-5天就能有变化，长的快的组织块边缘会变圆。

hwlightning

回复 deshenglll 的帖子
% f' r( [0 r% J. C: \. W' _" g/ F$ T+ j
你们一根15cm脐带可以做几个90cm培养皿（或者t75培养瓶）？做开始的培养基加几毫升？

woshibotao_01

不知道楼主所说很小的块儿具体体积是多少？" J+ ?' Z- L, k& i) G  J7 X! a
块飘起的程度应该和这几个因素密切相：一是铺皿后到加液的时间，2H感觉有点短，可以试试时间加长一些，使组织贴牢再加液。二是组织块的大小，应该在1-2立方毫米为佳，太大就不容易贴壁，还有就是加的液体体积，初次加入的量不应过多，过几天再加液或者换液，这样组织可能会贴的牢固一些。